核仁素對LPS所致炎癥因子IL-1β釋放的影響.pdf

1、膿毒癥(sepsis)是由感染引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)，常并發(fā)于嚴重創(chuàng)傷、燒傷、休克和外科大手術(shù)后，由其誘發(fā)的多器官功能障礙綜合征(MODS)已成為當(dāng)今外科患者的重要死亡原因。雖然膿毒癥的發(fā)生機制尚未完全闡明，但是革蘭氏陰性細菌胞壁上的脂多糖(LPS)即內(nèi)毒素啟動體內(nèi)免疫系統(tǒng)在膿毒癥發(fā)病中的重要性已受到廣泛關(guān)注。 核仁素(nucleolin)又稱C23，是真核細胞核仁中最主要的一種磷酸蛋白質(zhì)。其主要功能參與核糖體rR

2、NA的轉(zhuǎn)錄、核糖體亞單位組裝、成熟等功能。近年研究發(fā)現(xiàn)，核仁素在丙型肝炎病毒復(fù)制、人類免疫缺陷病毒與人副流感病毒感染宿主細胞、基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控等過程中也發(fā)揮了重要作用。然而，核仁素在炎癥反應(yīng)中是否具有及具有何種作用，目前尚不清楚。 本研究擬初步探討核仁素在脂多糖(LPS)所致炎癥反應(yīng)中的作用。采用大腸桿菌LPS處理RAW264.7小鼠巨噬細胞株以建立細胞炎癥模型，采用Western-blot觀察核仁素在LPS所致細胞炎癥反應(yīng)中的表達

3、改變；采用LPS(15mg/kg)經(jīng)腹腔注射小鼠復(fù)制小鼠內(nèi)毒素血癥模型，分別于注射LPS后6h、12h、24h提取肺組織總蛋白，用Western Blot檢測不同時間點核仁素的表達改變。進一步采用RAW264.7小鼠巨噬細胞通過瞬時轉(zhuǎn)染C23反義寡核苷酸和真核表達質(zhì)粒(pcDNA3.1-C23)，經(jīng)ELISA檢測LPS處理后不同時間點炎癥因子IL-1β的表達改變，探討核仁素在LPS所致炎癥反應(yīng)中的作用。 主要結(jié)果如下：

4、1.用500ng/ml的LPS處理RAW264.7細胞后，核仁素表現(xiàn)為兩條帶：其一分子量約為110kD，其二分子量約為80kD；與未處理組比較，110kD核仁素區(qū)帶在經(jīng)LPS處理6h后表達上調(diào)，12h上調(diào)最明顯并維持到36h；而80kD區(qū)帶在LPS處理后逐漸減少。 2.用LPS(15mg/kg)經(jīng)腹腔注射小鼠后，小鼠肺組織中核仁素顯示出兩條帶，其一分子量約為110kD，其二分子量約為80kD；與正常組相比，110kD核仁素于LP

5、S注射6h后開始表達上調(diào)，12h達到最高并維持到24h；80kD的核仁素則于注射LPS 6h后表達下調(diào)。 3.用含核仁素全長基因的真核表達載體(pcDNh3.1-C23)瞬時轉(zhuǎn)染PAW264.7細胞，發(fā)現(xiàn)核仁素過表達組LPS所致的IL-1β釋放較轉(zhuǎn)空載體組明顯增加。 4.采用核仁素反義寡核苷酸瞬時轉(zhuǎn)染RAW264.7細胞，發(fā)現(xiàn)核仁素低表達組LPS所致的IL-1β釋放則較正常細胞組和隨機寡核苷酸組明顯下降。 結(jié)論：