大鼠腦基底動脈EDHF反應(yīng)及外源性EDHF對腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、內(nèi)皮依賴性超極化因子（endothelium-derived hyperpolarizing factor，EDHF）是一種內(nèi)皮源性的血管舒張因子，是除NO和PGI2外控制血管自我穩(wěn)定性的第三種舒張血管的自體活性物質(zhì)。目前，在多種不同種類動物及人體內(nèi)的多處不同的血管中都發(fā)現(xiàn)存在EDHF反應(yīng)，但血管中的EDHF到底是那種物質(zhì)，現(xiàn)在還不是很清楚，尤其是在腦血管中，EDHF的化學(xué)本質(zhì)還存在許多爭議問題。
　　 內(nèi)源性硫化氫(hydro

2、gen sulfide，H2S)是新近發(fā)現(xiàn)的第3個氣體信使分子，具有多種生物學(xué)和生理學(xué)效應(yīng)，是一種重要的內(nèi)源性血管舒張因子。本實驗室研究表明在大鼠基底動脈中，H2S具有EDHF樣作用。本實驗擬對其抗腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用進(jìn)行探討。
　　 目的：
　　 1.探討過氧化氫(H2O2)和11,12-環(huán)氧二十碳三烯酸(11,12-EET)在內(nèi)皮依賴性超極化因子(endothelium-dependent hyperpolar

3、izing factor，EDHF)介導(dǎo)的大鼠腦基底動脈舒張中的作用。
　　 2.探討大鼠腦基底動脈內(nèi)皮細(xì)胞假定的EDHF（H2S）合成酶——胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase，CSE) mRNA的表達(dá)。
　　 3.探討外源性EDHF對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的影響。
　　 方法：
　　 1.采用離體血管舒縮功能測定實驗，檢測H2O2、11,12-EET及過氧化氫酶(CAT)

4、等對大鼠離體腦基底動脈血管環(huán)的舒張作用。
　　 2.運用胰蛋白酶及膠原酶消化基底動脈獲取單細(xì)胞混合懸液，磁珠分選法(magnetic cell separation system，MACS)分離純化基底動脈內(nèi)皮細(xì)胞，采用RT-PCR的方法檢測正常大鼠基底動脈內(nèi)皮細(xì)胞中內(nèi)源性合成硫化氫的酶CSE的表達(dá)。
　　 3.以硫化氫鈉(NaHS)為H2S的供體，采用線栓法復(fù)制局灶性腦缺血(MCAO)再灌注損傷模型，評價動物行為功能，

5、測定腦梗死范圍，腦組織中含水量、乳酸脫氫酶(LDH)的活性和丙二醛(MDA)的含量；采用HE染色法觀察腦組織病理結(jié)構(gòu)的改變。
　　 結(jié)果：
　　 1.在30 mmol/L的KCl預(yù)收縮的大鼠腦基底動脈環(huán)上，Ach可產(chǎn)生濃度依賴性的舒張作用；血管用NO合酶抑制劑(L-NAME，3×10-5mol/L)和PGI2合酶抑制劑(Indo，10-5mol/L)預(yù)處理后，Ach對基底動脈仍存在部分舒張作用，即非NO和非PGI2介導(dǎo)的

6、舒張。應(yīng)用L-NAME和Indo后，11,12-EET對大鼠基底動脈無明顯的舒張作用，H2O2僅有輕微舒張作用，但CAT對Ach介導(dǎo)的非NO和非PGI2反應(yīng)沒有影響。
　　 2.采用磁珠法分離純化得到正常大鼠生理狀態(tài)下基底動脈內(nèi)皮細(xì)胞，采用RT-PCR的方法檢測結(jié)果顯示大鼠基底動脈內(nèi)皮細(xì)胞中有CSE mRNA表達(dá)。
　　 3.在局灶性腦缺血再灌注損傷中，NaHS(0.195、0.39、0.78 mg/kg)能明顯縮小缺血

7、再灌注后腦梗死體積，改善神經(jīng)功能狀態(tài),降低腦含水量，NaHS(0.195、0.39、0.78 mg/kg)能減少局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠血清MDA、降低LDH的活性。NaHS(0.195、0.39、0.78 mg/kg)能夠不同程度的改善腦缺血再灌注大鼠腦組織病理結(jié)構(gòu)的改變。
　　 結(jié)論：
　　 1.在大鼠基底動脈中Ach介導(dǎo)的EDHF反應(yīng)即非NO和非PGI2介導(dǎo)的舒張中不涉及H2O2和11,12-EET。