去勢大鼠神經退變的線粒體機制：生物能量障礙可能是其最后通路.pdf

1、背景：阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一種伴有進行性認知和記憶功能減退的中樞神經系統(tǒng)退變性疾病。流行病學調查顯示絕經后女性AD的發(fā)病率顯著高于男性，是男性發(fā)病率的2～3倍。雌激素替代療法(ERT)可減少或推遲AD的發(fā)病。但是，ERT的應用由于存在增加乳腺癌和子宮內膜癌的發(fā)病率的危險性而受到限制。所以，金雀異黃酮，一種具有弱雌激素活性但又沒有明顯副作用的植物雌激素，有希望替代雌激素，成為預防和治療AD的新藥。

2、 目前，絕經后中樞神經退變及雌激素和植物雌激素的神經保護作用不明，一些研究表明，線粒體機能紊亂是AD發(fā)病的重要機制之一。而由于線粒體機能紊亂導致的生物能量障礙，很可能是眾多導致絕經后女性中樞神經退變機制的最后通路之一。 目的：本課題采用去卵巢Sprague-DaWley大鼠模型模擬絕經后女性的病理改變，并采用金雀異黃酮和苯甲酸雌二醇替代體內的內源性雌二醇作為陽性對照，觀察海馬組織ATP含量，海馬線粒體ATP含量及線粒體A

3、TP合成率的變化，以探討絕經后女性中樞神經系統(tǒng)退變及雌激素和植物雌激素神經保護作用的線粒體機制。 方法： 1、海馬ATP含量的檢測：37只2～3月齡健康雌性SD大鼠隨機分為9組：①正常對照組、②去勢2d組(OVX-2-day)、③去勢4d組(OVX-4-day)、④去勢6d組、⑤去勢8d組(OVX-8-day)、⑥去勢10d組(OVX-10-day)、⑦去勢12d組(OVX-12-day)、⑧苯甲酸雌二醇組(OVX-EB

4、，50 μl 5﹪的苯甲酸雌二醇)、⑨金雀異黃酮組(OVX-genistein，50 μl 25﹪的金雀異黃酮)。正常對照組不經任何處理即處死；去勢2、4、6、8、10、12d組則分別在摘除雙側卵巢后2、4、6、8、10、12d處死；苯甲酸雌二醇組和金雀異黃酮組在摘除卵巢后即開始皮下注射給藥，隔日一次，并于去勢后第6天處死。 2、海馬線粒體ATP含量的檢測：20只2～3月齡健康雌性SD大鼠隨機分為4組：①正常對照組、②去勢組(O

5、VX-only)、③苯甲酸雌二醇組(OVX-EB，50 μl 5﹪的苯甲酸雌二醇)、④金雀異黃酮組(OVX-genistein，50 μl 25﹪的金雀異黃酮)。正常對照組不經任何處理即處死；去勢組則在摘除雙側卵巢后6d處死；苯甲酸雌二醇組和金雀異黃酮組在摘除卵巢后即開始皮下注射給藥，隔日一次，并于去勢后第6天處死。 3、海馬線粒體ATP合成率的檢測：20只2～3月齡健康雌性SD大鼠隨機分為4組：①正常對照組、②去勢組(OVX-

6、only)、③苯甲酸雌二醇組(OVX-EB，50 μl 5﹪的苯甲酸雌二醇)、④金雀異黃酮組(OVX-genistein，50 μl 25﹪的金雀異黃酮)。正常對照組不經任何處理即處死；去勢組則在摘除雙側卵巢后6d處死；苯甲酸雌二醇組和金雀異黃酮組在摘除卵巢后即開始皮下注射給藥，隔日一次，并于去勢后第6天處死。3部分實驗均采用反相高效液相法(HPLC)分別對ATP含量進行測定。 結果： ①海馬ATP含量的檢測：單因素方差

7、分析顯示在去卵巢后的2、4、6、8、10、12d組，海馬ATP含量的差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。最小有意義t(LSDt)檢驗表明，海馬ATP含量在正常對照組，去勢后2， 4， 10d組，苯甲酸雌二醇組和金雀異黃酮組之間差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)，但去勢后6d組的海馬ATP含量顯著低于其他組(p<0.05)。去勢后8d組的海馬ATP含量與去勢后6d組的海馬ATP含量的差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。 ②海馬線粒體AT

8、P含量的檢測：單因素方差分析顯示各組的線粒體ATP含量之間的差異有統(tǒng)計學意義(p>0.05)。LSD t檢驗表明，線粒體ATP含量在正常對照組，苯甲酸雌二醇組和金雀異黃酮組之間差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)，但去勢組的線粒體ATP含量顯著低于其他組(p>0.05)。 ③海馬線粒體ATP合成率的檢測：單因素方差分析顯示各組的線粒體ATP合成率之間的差異有統(tǒng)計學意義(p>0.05)。LSD t檢驗表明，線粒體ATP合成率在正常對照

9、組，苯甲酸雌二醇組和金雀異黃酮組之間差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)，但去勢組的線粒體ATP合成率顯著低于其他組(p>0.05)。 結論：去勢后海馬ATP含量呈現(xiàn)一過性改變，提示雌激素撤退后腦組織可能存在能量代謝障礙；線粒體ATP含量和線粒體ATP合成率降低，表明雌激素撤退可致線粒體機能減低，但其機制還有待進一步探討；金雀異黃酮和雌二醇則有助于保護線粒體機能從而恢復線粒體正常的能量代謝。這些結果表明，雌激素撤退后由線粒體功能紊亂