線粒體保護作用可能是人參皂苷Rg1延緩細胞復制衰老的關鍵環(huán)節(jié).pdf

1、目的：用t-BHP(三丁基過氧化氫，tert-butylhydroperoxide)誘導WI-38細胞衰老，建立體外細胞衰老的模型，并研究人參皂苷Rg1(ginsenosideRg1)對t-BHP誘導的細胞衰老的保護作用及可能的線粒體調控機制。 方法：用t-BHP100μmol/L作用WI-38細胞，從第30代的培養(yǎng)細胞開始，隔代作用1次，每次1h，共4次，誘導細胞衰老。從光鏡、透射電鏡觀察細胞形態(tài)及超微結構的變化；流式細胞術分

2、析細胞周期，計算G1期細胞的比例；SAβ-半乳糖苷酶的細胞化學染色，確定成功建立體外細胞衰老的模型。然后，將WI-38細胞隨機分成4組，用不同劑量的人參皂苷Rg1處理模型細胞，比較不同劑量的Rg1對模型細胞中衰老指征的影響，并探討對細胞內ATP、線粒體膜電位的變化有無改善作用，同時通過測定線粒體呼吸鏈復合物Ⅰ～Ⅳ的活性變化以探討Rg1延緩衰老的可能分子機制。 結果：100μmol/Lt-BHP作用4次后，WI-38細胞出現(xiàn)衰老的

3、特征，細胞增殖分裂停止，細胞體積增大、胞體變平、次級溶酶體增多，線粒體腫脹，同時G1期細胞比例增加，β-半乳糖苷酶染色陽性細胞數(shù)增加，提示t-BHP能有效地誘導細胞衰老，可用于建立體外細胞衰老模型，而10μmol/L人參皂苷Rg1能明顯地對抗WI-38細胞的這種改變，具有肯定的抗衰老作用。同時研究證實經t-BHP作用后，WI-38細胞中的線粒體膜電位有下降趨勢，ATP產量減少，呼吸鏈復合物Ⅳ的活性降低，提示t-BHP可能通過對呼吸鏈復合

4、物Ⅳ的氧化損傷作用誘導細胞衰老；而經不同濃度人參皂苷Rg1處理后線粒體膜電位有提高趨勢，ATP水平和呼吸鏈復合物Ⅳ的活性則顯著增高，尤其以10μmol/L人參皂苷Rg1的改善作用最為明顯。提示人參皂苷Rg1可能主要通過提高線粒體呼吸鏈復合物Ⅳ的活性來提高ATP產量，從而對抗t-BHP誘導的線粒體損害，發(fā)揮延緩t-BHP誘導的細胞衰老作用。 結論： 1、t-BHP誘導WI-38細胞，成功地建立了體外細胞衰老模型。人參皂苷R

5、g1能有效對抗t-BHP誘導的細胞衰老，有較好的抗衰老作用，以10μmol/L人參皂苷Rg1抗t-BHP誘導的細胞衰老作用最為明顯。 2、t-BHP可能通過對線粒體呼吸鏈復合物Ⅳ的氧化損傷作用誘導細胞衰老。不同濃度的人參皂苷Rg1處理后能夠不同程度地提高細胞ATP水平和呼吸鏈復合物Ⅳ的活性，尤其以10μmol/L人參皂苷Rg1的改善作用最為明顯。提示人參皂苷Rg1可能主要通過提高線粒體呼吸鏈復合物Ⅳ的活性來提高ATP產量，從而對