絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙的病理生理基礎(chǔ)及通絡(luò)方藥干預(yù)研究.pdf

1、目的：本研究以絡(luò)病理論為指導(dǎo)，以血管內(nèi)皮功能障礙為切入點(diǎn)，建立病證結(jié)合絡(luò)氣虛滯中醫(yī)證候動(dòng)物模型與細(xì)胞模型，從整體與細(xì)胞水平探討絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙的病理生理基礎(chǔ)，并研究不同類別通絡(luò)方藥的干預(yù)作用。 血管內(nèi)皮功能障礙(endothelial dysfunetion，ED)系血管內(nèi)皮細(xì)胞在多種病理因素(如高血壓、高血脂、糖尿病、吸煙、壓力等)刺激下失去正常功能的病理過(guò)程，與氧化應(yīng)激、免疫損傷及炎癥機(jī)制關(guān)系密切，主要表現(xiàn)為內(nèi)皮依

2、賴性舒張功能障礙及血管活性物質(zhì)分泌紊亂，是心腦血管病發(fā)生的始動(dòng)因素和重要環(huán)節(jié)。 中醫(yī)學(xué)認(rèn)為血液在血管中正常運(yùn)行需要?dú)獾耐七\(yùn)，氣虛運(yùn)血無(wú)力或氣滯血運(yùn)不暢均可導(dǎo)致血液運(yùn)行障礙及血管病變。基于絡(luò)病理論研究的“三維立體網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)”，廣義絡(luò)脈分為氣絡(luò)和脈絡(luò)，脈絡(luò)運(yùn)行血液，其解剖形態(tài)與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)血管系統(tǒng)具有同一性，由此而提出“脈絡(luò)—血管系統(tǒng)病”(vessel-collateral and vascular system disorders，VC

3、VSD)概念；氣絡(luò)運(yùn)行經(jīng)氣，發(fā)揮溫煦充養(yǎng)、防御衛(wèi)護(hù)、信息傳導(dǎo)、調(diào)節(jié)控制作用。絡(luò)氣虛滯(stagnancy of collateral-qi in a deficiency condition，SCQDC)是脈絡(luò)病變由功能性病變向器質(zhì)性病變發(fā)展的早期階段，其引起的脈絡(luò)自適應(yīng)、自調(diào)節(jié)、自穩(wěn)態(tài)功能失常，為“脈絡(luò)—血管系統(tǒng)病”(vessel-collateral and vasctllarsystem disorders，VCVSD)始動(dòng)因素并

4、貫穿和影響病變的全過(guò)程，與血管內(nèi)皮功能障礙具有內(nèi)在一致性，也涵蓋了西醫(yī)學(xué)更廣泛的神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)功能異常對(duì)血管病變的影響。這啟發(fā)我們將中醫(yī)氣血相關(guān)的絡(luò)病理論特色與現(xiàn)代微觀研究有機(jī)結(jié)合，探討“絡(luò)氣虛滯”狀態(tài)下NEI 網(wǎng)絡(luò)調(diào)控失常變化規(guī)律及其與血管內(nèi)皮功能障礙之間的內(nèi)在聯(lián)系，并探索不同類別通絡(luò)方藥的干預(yù)機(jī)制。 方法：本研究采用同型半胱氨酸制作血管內(nèi)皮功能障礙的基礎(chǔ)模型，在此基礎(chǔ)上應(yīng)用“基礎(chǔ)進(jìn)食+強(qiáng)迫負(fù)重游泳”誘發(fā)氣虛證候的

5、方法，建立絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙病證結(jié)合的動(dòng)物模型。以通過(guò)臨床流行病學(xué)調(diào)查建立的“脈絡(luò)—血管系統(tǒng)病”證候診斷標(biāo)準(zhǔn)為基準(zhǔn)，分別從中醫(yī)證候?qū)W、血管內(nèi)皮功能變化及血管舒縮反應(yīng)性改變等方面對(duì)所建模型進(jìn)行評(píng)價(jià)，并應(yīng)用單味益氣中藥、益氣活血組分配伍方藥、通絡(luò)復(fù)方從不同層次進(jìn)行通絡(luò)反證。以此為實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，探討絡(luò)氣虛滯狀態(tài)下NEI 網(wǎng)絡(luò)的變化規(guī)律及其與血管內(nèi)皮功能障礙之間的內(nèi)在相關(guān)性，以及通絡(luò)方藥改善血管內(nèi)皮功能的作用機(jī)制。同時(shí)培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株

6、ECV-304，通過(guò)加入絡(luò)氣虛滯型內(nèi)皮功能障礙模型大鼠血清，建立體外絡(luò)氣虛滯型內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型，并應(yīng)用上述不同通絡(luò)方藥進(jìn)行干預(yù)，在細(xì)胞水平上進(jìn)一步探討絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷機(jī)制及通絡(luò)方藥的影響。 本實(shí)驗(yàn)建立了絡(luò)氣虛滯型內(nèi)皮功能障礙病證結(jié)合動(dòng)物模型，應(yīng)用生物信息學(xué)方法探討了絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙與 NEI 網(wǎng)絡(luò)相關(guān)的病理生理學(xué)基礎(chǔ)及可能的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，并探討了不同類別通絡(luò)方藥干預(yù)機(jī)制，為運(yùn)用通絡(luò)方藥防治心腦血管病提供實(shí)驗(yàn)依

7、據(jù)。 1．本研究以近年來(lái)社會(huì)心理因素對(duì)人體造成的超負(fù)荷壓力在各種急性心腦血管病發(fā)生中的影響為立題背景，以絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙臨床證候診斷標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)，首先采用高蛋氨酸飲食誘發(fā)高同型半胱氨酸血癥建立血管內(nèi)皮功能障礙模型，以“基礎(chǔ)進(jìn)食+強(qiáng)迫負(fù)重游泳”法誘發(fā)氣虛證候，并以人參、雙參、通心絡(luò)超微粉三種通絡(luò)藥物進(jìn)行干預(yù)，建立絡(luò)氣虛滯病證結(jié)合動(dòng)物模型，觀察并記錄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的證候?qū)W表現(xiàn)、檢測(cè)血管內(nèi)皮功能及血管內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)

8、果顯示，所建動(dòng)物模型表現(xiàn)出了明顯的絡(luò)氣虛滯證候特征，同時(shí)血管內(nèi)皮功能及內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)顯著下降，三個(gè)層次的通絡(luò)干預(yù)可使上述病、證得到不同程度的改善，而且與“脈絡(luò)—血管系統(tǒng)病”絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙的臨床證候診斷標(biāo)準(zhǔn)基本吻合，表明模型成功。 2．實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，HCY組血管內(nèi)皮功能受損，AngⅡ明顯升高，但絡(luò)氣虛滯型內(nèi)皮功能障礙與HCY組比較，AngⅡ升高更為明顯，差異顯著，顯示絡(luò)氣虛滯是AngⅡ上升的重要因素。同時(shí)看到，腎素

9、、醛固酮下降，RAAS系統(tǒng)并未激活，而NE與AngⅡ呈現(xiàn)出同步升高的密切關(guān)系，提示交感神經(jīng)興奮可能是AngⅡ升高的主要原因，這反映“過(guò)勞傷氣”所致植物神經(jīng)功能失調(diào)可能在血管病變中起著重要作用。而 NEI 網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)功能出現(xiàn)了嚴(yán)重紊亂，主要表現(xiàn)為下丘腦機(jī)能偏亢，受其調(diào)節(jié)的垂體功能反而低下，同時(shí)該功能軸靶腺腎上腺皮質(zhì)功能也表現(xiàn)出低下，提示NEI網(wǎng)絡(luò)的穩(wěn)態(tài)失衡可能與絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙發(fā)生發(fā)展具有密切關(guān)系。 3．生物信息學(xué)的研究結(jié)

10、果表明，絡(luò)氣虛滯組 NEI 網(wǎng)絡(luò)指標(biāo)和內(nèi)皮功能障礙指標(biāo)之間可以形成相互獨(dú)立的子系統(tǒng)(如：ET與CRH、ACTH、GC及ALD；AngⅡ與ET、IL-1；PGI2與ALD；NO與ALD分別是4個(gè)相互獨(dú)立的系統(tǒng))，這些子系統(tǒng)是按照復(fù)雜系統(tǒng)最優(yōu)化原則發(fā)生相互聯(lián)系，而正常對(duì)照組、HCY組、通絡(luò)干預(yù)組不存在這種子系統(tǒng)之間的相互聯(lián)系，提示過(guò)勞傷氣是導(dǎo)致 NEI 網(wǎng)絡(luò)紊亂的主要因素，絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙可能與 NEI 網(wǎng)絡(luò)穩(wěn)態(tài)失衡存在著密切相關(guān)

11、性，后者可能是該狀態(tài)下血管內(nèi)皮功能障礙發(fā)生、發(fā)展的病理生理學(xué)基礎(chǔ)之一。2005 年本課題啟動(dòng)時(shí)經(jīng)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)信息研究所查詢MEDLINE(1966.1～2005.6)、PubMed(2005．1～2005．6)、中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)(1978．1～2005．4)、中文生物醫(yī)學(xué)期刊文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)(2005．1～2005．6)文獻(xiàn)，僅有神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫分系統(tǒng)與血管病變相互關(guān)系的文獻(xiàn)報(bào)道，未見(jiàn) NEI 網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)功能失常對(duì)血管病變影響的報(bào)

12、道。盡管本研究?jī)H部分揭示 NEI 網(wǎng)絡(luò)功能失調(diào)對(duì)血管內(nèi)皮功能障礙的影響，但由于 NEI 網(wǎng)絡(luò)作為多維立體調(diào)控網(wǎng)絡(luò)在保持人體穩(wěn)態(tài)機(jī)制中的重要作用，深入探討其對(duì)血管病變影響及其內(nèi)在規(guī)律需要引起重視。 4．整體動(dòng)物模型研究發(fā)現(xiàn)，絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙 COHb 含量顯著下降，HO-1mRNA和蛋白表達(dá)下調(diào)，同時(shí)JNK和c-Jun mRNA及JNK和磷酸化c-Jun蛋白水平均顯著降低，提示絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙HO-1/CO 系

13、統(tǒng)被抑制。以絡(luò)氣虛滯血管內(nèi)皮功能障礙動(dòng)物模型血清干預(yù)體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，建立細(xì)胞損傷模型，進(jìn)一步從細(xì)胞水平上證實(shí)了絡(luò)氣虛滯動(dòng)物模型所引起的HO-1/CO系統(tǒng)被抑制與JNK/c-Jun信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)。 5．整體及細(xì)胞水平的研究結(jié)果顯示，通絡(luò)方藥可明顯升高NO，降低ET，改善血管內(nèi)皮超微結(jié)構(gòu)，同時(shí)可降低CRH、AngⅡ及IL-6 等水平，升高血漿腎素、醛固酮及糖皮質(zhì)激素等水平，基于生物信息學(xué)分析結(jié)果，絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障