降脂通絡(luò)軟膠囊對(duì)高脂血癥大鼠血管內(nèi)皮的干預(yù)作用.pdf

1、目的：高脂血癥(Hyperlipemia,HLP)導(dǎo)致的血管內(nèi)皮(blood vessel endothelium，BVE)功能障礙是許多心血管疾病發(fā)生的始動(dòng)因素，因此，改善血管內(nèi)皮功能已成為防治心血管疾病的一種新型治療靶點(diǎn)。羥甲基戊二酰輔酶A(hydroxy-methyl-glutaryl coenzyme A，HMG-CoA)還原酶抑制劑如辛伐他汀、普伐他汀降脂作用療效肯定，但其有橫紋肌溶解、肝功能損傷等副作用且療效的持續(xù)性、長(zhǎng)期服

2、用的安全性一直是治療的難題。近年來(lái)有大量研究表明，中藥可從不同環(huán)節(jié)干預(yù)高脂血癥，且效果明顯。降脂通絡(luò)軟膠囊(JZT)的主要成分為姜黃素(Curcumin)，姜黃素為常用中藥—姜黃提取的有效成分，具有理氣活血、祛痰降濁等功效，主要用于治療氣滯血瘀型高脂血癥。藥理藥效學(xué)研究表明，該藥能明顯降低甘油三酯(TG-C)、膽固醇(TC-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)，提高高密度脂蛋白(HDL-C)的含量，具有抗氧化作用。本次研究擬利用高脂飼料復(fù)制

3、高脂血癥大鼠模型，觀察降脂通絡(luò)軟膠囊對(duì)高脂血癥引起的血管內(nèi)皮損傷的干預(yù)作用，并探討其可能的作用機(jī)制。 方法： 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、分組及模型復(fù)制：大鼠60只，體重200～250g。普通喂養(yǎng)動(dòng)物1周。一周后禁食不禁水12小時(shí)眶內(nèi)采血檢測(cè)血脂，均為正常者用于實(shí)驗(yàn)。根據(jù)體重排序，然后隨機(jī)分 為4組：即空白對(duì)照組(簡(jiǎn)稱正常組)15只、模型對(duì)照組(簡(jiǎn)稱模型組)15只、西藥治療組(簡(jiǎn)稱辛伐他汀組)15只、降脂通絡(luò)軟膠囊治療組(簡(jiǎn)稱

4、降脂通絡(luò)軟膠囊組)15只。除正常組外，其他3組自實(shí)驗(yàn)第一天起喂飼高脂飼料，正常組喂飼普通飼料。第4周末禁食不禁水12小時(shí)眶內(nèi)采血檢測(cè)血脂，模型組血脂升高且穩(wěn)定后，確認(rèn)為高脂血癥。模型各組第4周末確定為高脂血癥后，按血脂水平重新分組，組別與動(dòng)物數(shù)不變。 2 治療方法：于第5周起開(kāi)始灌胃給藥。降脂通絡(luò)軟膠囊組灌服降脂通絡(luò)軟膠囊0.571g·kg<'-1>·d<'-1>，西藥組灌服辛伐他汀5.71mg·kg<'-1>·d<'-1>；正

5、常組和模型組灌以相應(yīng)量的生理鹽水。各組灌胃共6周。 3 觀察指標(biāo)及方法： 3．1至10周末，10％水合氯醛腹腔麻醉后，無(wú)菌操作，打開(kāi)腹腔，從大鼠下腔靜脈采血，提取血清以酶比色法檢測(cè)TC、TG、LDL-C、HDL-C；黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)超氧化物歧化酶(SOD)、硫代巴比妥酸法檢測(cè)丙二醛(MDA)。提取血漿采用放射免疫法測(cè)定血栓素B<,2>(Thromboxane B<,2>，TXB<,2>)、6-酮-前列腺素F<,1α>(

6、6-Keto-PGF<,1α>)。 3．2分離主動(dòng)脈直至髂動(dòng)脈分叉處，剪斷，徹底清除其周圍的結(jié)締組織，冰鹽水沖洗，隨機(jī)取材，取一部分置于4％多聚甲醛固定，用于光鏡觀察，使用計(jì)算機(jī)圖象分析系統(tǒng)(HMIAS-2000)進(jìn)行半定量分析，測(cè)量?jī)?nèi)膜厚度及中膜厚度；再取一部分置于2.5％戊二醛固定，用于電鏡觀察。 3．3分離主動(dòng)脈隨機(jī)取材，4％多聚甲醛固定，逐級(jí)酒精脫水，石蠟包埋，切片，免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞選擇素(E-se

7、lectin)，用免疫酶標(biāo)技術(shù)(SP法)。 結(jié)果： 1 實(shí)驗(yàn)大鼠一般狀況 正常組大鼠食欲正常，反應(yīng)敏捷，毛色光澤，皮下脂肪厚，糞便呈麥粒狀。其他三組實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)有厭食，一周后恢復(fù)正常，反應(yīng)敏捷，被毛有光澤，飲水、便質(zhì)、尿量正常。實(shí)驗(yàn)第6周鼠尾均有不同程度的結(jié)節(jié)形成，凸出皮膚，模型組多數(shù)鼠頭部及臀部出現(xiàn)脫毛，被毛豎起。 2 各組大鼠血脂變化的比較并根據(jù)公式計(jì)算動(dòng)脈硬化指數(shù)(atherogenic index,

8、AI)：AI=(TC-HDL-C)/HDL-C 模型組血清TC、TG、LDL-C和AI均較正常組顯著升高(P<0.01)，HDL-C亦較正常組升高(P<0.05)，與模型組比較，兩治療組血清TC、TG、LDL-C和AI含量顯著降低，HDL-C顯著升高(P<0.01)，兩治療組間TC差異顯著(P<0.05)，其余指標(biāo)無(wú)顯著性差異(P>0.05)，兩治療組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。 3 主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)改變 3．1光

9、鏡觀察及主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)改變半定量分析結(jié)果 3．1．1光鏡觀察 正常組動(dòng)脈內(nèi)膜光滑完整，內(nèi)膜下間隙較??；模型組血管壁增厚，內(nèi)皮細(xì)胞(endothelial cell,EC)廣泛損傷脫落，脂質(zhì)沉積，內(nèi)皮下間隙增寬；降脂通絡(luò)軟膠囊組內(nèi)膜基本完整，單層內(nèi)皮細(xì)胞連接尚緊密，與模型組相比，脂質(zhì)條紋明顯減少；辛伐他汀組動(dòng)脈內(nèi)膜增厚、內(nèi)皮細(xì)胞損傷及脂質(zhì)沉積等病理改變較輕，可見(jiàn)EC缺失。 3．1．2主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)改變半定量分析結(jié)果

10、 正常組主動(dòng)脈內(nèi)膜光滑，肉眼無(wú)脂質(zhì)形成，組織學(xué)切片示內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)皮下無(wú)泡沫細(xì)胞沉積；模型組主動(dòng)脈內(nèi)膜/中膜厚度之比達(dá)1.03±0.27，較正常組顯著升高(P<0.01)，辛伐他汀組和降脂通絡(luò)軟膠囊組主動(dòng)脈內(nèi)膜/中膜厚度比值顯著低于模型組(P<0.01)，降脂通絡(luò)軟膠囊組主動(dòng)脈內(nèi)膜/中膜厚度比值低于辛伐他汀組(P<0.05)。 3．2掃描電鏡觀察 正常組EC界限清楚，排列規(guī)整，連接緊密。模型組部分呈收縮狀態(tài)，體

11、積縮小，細(xì)胞間隙增大或出現(xiàn)深大裂隙；EC胞膜表面呈大小不等的蟲(chóng)蝕狀、火山口狀缺損，并可見(jiàn)大片EC崩解，甚至脫落僅余殘基，區(qū)內(nèi)有血小板、血細(xì)胞和細(xì)胞碎屑纖維素等附著。兩治療組EC較完整，排列較整齊，可見(jiàn)少量EC缺損，細(xì)胞膜部分破壞，呈小洞狀。 3．3透射電鏡觀察 正常組EC完整，細(xì)胞間連接緊密，胞質(zhì)互相覆蓋；模型組EC間連接處胞質(zhì)分離，變直、變寬，出現(xiàn)較大間隙，并可見(jiàn)單核細(xì)胞(MC)黏附于內(nèi)皮表面。大部分EC殘缺、脫落，表

12、面有血小板黏附。兩治療組可見(jiàn)EC較完整，覆蓋于內(nèi)膜表面，細(xì)胞連接較好，MC黏附減少。 4 各組大鼠SOD活性及MDA含量的比較 與正常組比較，模型組大鼠血清SOD活性明顯降低(P<0.05)，MDA含量則顯著增高，(P<0.01)；與模型組比較，兩治療組血清SOD活性顯著升高(P<0.01)，MDA含量顯著降低(P<0.01)。兩治療組相比，降脂通絡(luò)軟膠囊組SOD活性高于辛伐他汀組，MDA含量低于辛伐他汀組，但兩指標(biāo)兩組

13、間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 5 各組大鼠TXB<,2>、6-Keto-PG<,1α>含量的比較 與正常組相比，模型組大鼠血漿TXB<,2>含量明顯升高(P<0.01)，6-Keto-PGF<,1α>含量顯著降低(P<0.01)。兩治療組與模型組相比，血漿TXB<,2>水平明顯下降(P<0.01)，血漿6-Keto-pnF<,1α>水平明顯上升(P<0.01，P<0.05)；兩治療組比較，血漿TXB<,2>水平無(wú)統(tǒng)計(jì)

14、學(xué)差異(P>0.05)，血漿6-Keto-PGF<,1α>水平降脂通絡(luò)軟膠囊組高于辛伐他汀組(P<0.01)。 6主動(dòng)脈E-selectin的免疫組化結(jié)果 E-selectin主要表達(dá)于主動(dòng)脈內(nèi)皮組織，呈棕黃色顆粒。正常組有微量表達(dá)，模型組E-selectin的表達(dá)增強(qiáng)，降脂通絡(luò)軟膠囊組及辛伐他汀組E-selectin的表達(dá)均較少。 結(jié)論： 本實(shí)驗(yàn)成功復(fù)制SD大鼠食餌性高脂血癥病變的模型，應(yīng)用降脂通絡(luò)軟膠

15、囊進(jìn)行干預(yù)性治療，綜合分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以得出如下結(jié)論： 1 降低TC、TG、LDL-C和AI，升高HDL-C，改善食餌性高脂血癥大鼠的脂代謝。 2 通過(guò)對(duì)主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)改變的觀察，提示降脂通絡(luò)軟膠囊可能有保護(hù)和修復(fù)血管內(nèi)皮，改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，防治高脂血癥的作用，其作用機(jī)制可能與以下三種途徑有關(guān)： 2．1升高SOD活性，降低MDA含量，抗脂質(zhì)過(guò)氧化，減輕氧自由基的損傷，影響細(xì)胞激素分泌。 2．2增強(qiáng)前列環(huán)