重癥急性胰腺炎血管內(nèi)皮功能障礙的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分重癥急性胰腺炎大鼠模型的建立及其血管內(nèi)皮功能變化
　　目的：建立易復(fù)制，可操作性，穩(wěn)定性好的重癥急性胰腺炎(SAP)動(dòng)物模型，觀察在SAP病理狀態(tài)下血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)形態(tài)學(xué)、功能學(xué)改變。
　　方法：健康雄性SD大鼠64只，隨機(jī)分為假手術(shù)組（C組），SAP組（A組），每組32只。C組開腹后只翻動(dòng)十二指腸及胰腺后關(guān)腹;A組胰膽管內(nèi)逆行輸注1.5％脫氧膽酸鈉制備SAP模型。術(shù)后6、12、24、48h分別處死大鼠（每個(gè)時(shí)

2、點(diǎn)8只），觀察胰腺組織形態(tài)學(xué)改變并進(jìn)行評(píng)分;胰腺腺泡細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞超微病理改變;檢測(cè)血清淀粉酶含量;檢測(cè)腸系膜上動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒縮功能。
　　結(jié)果：1.A組大鼠胰腺組織出現(xiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)、腺泡細(xì)胞水腫、顆粒樣凝固性壞死，小葉結(jié)構(gòu)破壞等典型的壞死性胰腺炎的病理改變，胰腺病理學(xué)評(píng)分較C組顯著升高(P＜0.05);并且隨著時(shí)間延長(zhǎng)，病變逐漸加重(P＜0.05)，A組于造模6小時(shí)光鏡下觀察到胰腺內(nèi)血栓形成;C組胰腺組織形態(tài)正常。2.透射電

3、鏡下觀察C組胰腺腺泡細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本正常;A組腺泡細(xì)胞腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)顯著擴(kuò)張，細(xì)胞內(nèi)見大量空泡; A組胰腺內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞褶皺，腫脹，基底膜變疏松，胞膜破損甚至細(xì)胞死亡脫落。3.A組各時(shí)間點(diǎn)血清淀粉酶顯著高于C組(P＜0.05)，并于12h達(dá)高峰，與同組24h、48h水平無顯著差異;C組組間無差異。4.A組血管內(nèi)皮舒張度6h即較C顯著下降（P＜0.05），之后隨著時(shí)間的推移，緩慢下降;6h、12h血管內(nèi)皮收縮反應(yīng)度與C組無明

4、顯差異，至24h后明顯降低(P＜0.05);C組血管內(nèi)皮依賴性收縮反應(yīng)度正常。
　　結(jié)論：1.應(yīng)用逆行性胰膽管注射1.5％脫氧膽酸鈉可以制備SAP動(dòng)物模型，造模后大鼠血清淀粉酶改變，病理切片及透射電鏡下觀察符合SAP病理及超微病理改變。2.AP發(fā)病的早期即發(fā)生血管內(nèi)皮損傷的形態(tài)學(xué)和功能學(xué)改變。
　　第二部分重癥急性胰腺炎血管內(nèi)皮功能障礙發(fā)生機(jī)制及影響因素
　　目的：探討重癥急性胰腺炎血管內(nèi)皮功能障礙的發(fā)生機(jī)制及影響因素

5、。
　　方法：64只雄性SD大鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)組（C組），SAP組（A組），每組32只，按第一部分方法制作動(dòng)物模型。建立模型后分別于6h、12h、24h、48h處死大鼠，取下腔靜脈血用ELISA檢測(cè)血清TNF-α、ET-1含量;用比色法檢測(cè)胰腺組織MDA含量及MPO活力;取胰腺組織用RTQ-PCR檢測(cè)胰腺組織ICAM-1、VCAM-1、E-selectin基因表達(dá);用Western-blot檢測(cè)胰腺組織ICAM-1、VCAM-1

6、、E-selectin蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：1.A組大鼠血清TNF-α水平早期即迅速升高，并且隨著時(shí)間的推移，呈逐漸增高趨勢(shì);A組大鼠血清ET-1水平在6h即顯著升高，并持續(xù)升高至12h達(dá)高峰，至48h仍維持較高水平，各時(shí)點(diǎn)TNF-α、ET-1均較C組顯著升高(P＜0.05)。2.與C組同一時(shí)點(diǎn)相比較，A組胰腺組織MDA、MPO含量顯著增高(P＜0.05)并且呈現(xiàn)隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加的趨勢(shì)。3.C組大鼠胰腺組織中ICAM-1、VCAM

7、-1、E-selectin基因低水平表達(dá);A組大鼠胰腺各時(shí)點(diǎn)ICAM-1基因表達(dá)較C組顯著增高(P＜0.05)，于12h達(dá)峰值后持續(xù)高表達(dá)，12h，24h，48h表達(dá)量無顯著差異;A組各時(shí)點(diǎn)VCAM-1基因表達(dá)較C組顯著增高(P＜0.05)，6h后表達(dá)增高迅速，12h達(dá)高峰，并持續(xù)高表達(dá)至48小時(shí);E-selectin各時(shí)點(diǎn)基因表達(dá)較C組顯著增高（P＜0.05），兩組組間各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)無明顯差異。4.ICAM-1蛋白在C組中僅少量表達(dá)，A

8、組中6h表達(dá)較C明顯升高，12h，24h，48h呈較高表達(dá);VCAM-1蛋白在C組中微量表達(dá)，A組造模6h后顯著增高，24h達(dá)峰值，48h表達(dá)水平仍較高;E-selectin在C組中僅少量表達(dá)，A組中6h其表達(dá)量即明顯增高，并且呈高水平表達(dá)維持至48h。
　　結(jié)論：SAP時(shí)血清TNF-α、ET-1水平，胰腺M(fèi)PO活力，MDA含量及ICAM-1、VCAM-1、E-selectin基因及蛋白表達(dá)顯著增高;炎性因子、氧化應(yīng)激及粘附分子共

9、同參與了SAP血管內(nèi)皮功能損傷的病理過程。
　　第三部分低分子肝素對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠的保護(hù)作用
　　目的：探討低分子肝素對(duì)SAP大鼠的保護(hù)作用。
　　方法：96只雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（C組），急性壞死性胰腺炎組(A)組，低分子肝素干預(yù)組（G組），每組32只，按第一部分實(shí)驗(yàn)方法制作動(dòng)物模型，C組于SAP造模后給予皮下注射低分子肝素(10U/100g)。于造模后6h、12h、24h、48h處死大鼠，觀察胰腺病理改

10、變并評(píng)分;檢測(cè)血清淀粉酶含量;檢測(cè)血清TNF-α、ET-1含量;檢測(cè)胰腺組織MDA含量及MPO活力;檢測(cè)胰腺組織E-selectin mRNA及蛋白表達(dá)水平;檢測(cè)腸系膜上動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒縮功能。
　　結(jié)果：1.G組各時(shí)點(diǎn)胰腺病理學(xué)評(píng)分較A組顯著下降(P＜0.05);2.G組各時(shí)點(diǎn)血清淀粉酶較A組顯著下降(P＜0.05);3.G組血清TNF-α及ET-1水平較A組顯著下降(P＜0.05);4.G組大鼠各時(shí)點(diǎn)MDA水平較A組大鼠同時(shí)點(diǎn)

11、無顯著差異，較C組大鼠同時(shí)點(diǎn)胰腺M(fèi)DA含量高(P＜0.05);G組大鼠各時(shí)點(diǎn)MPO水平較A組大鼠同時(shí)點(diǎn)明顯降低，6h、12h較C組同一時(shí)點(diǎn)差異無顯著性，24h、48h較C組升高(P＜0.05);5.G組各時(shí)點(diǎn)E-selectinmRNA及蛋白表達(dá)水平較A組顯著下降;6.G組大鼠血管內(nèi)皮舒張反應(yīng)度6h、12h較A組升高（P＜0.05），與C組無顯著差異，24h，48h較A組同一時(shí)間點(diǎn)無顯著差異，較C組同一時(shí)間點(diǎn)降低(P＜0.05);G組大