Ghrelin對VEGF、Flt-1在正常妊娠和妊高癥胎盤中的表達(dá)調(diào)節(jié)研究.pdf

1、內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文Ghrelin對VEGF、Flt1在正常妊娠和妊高癥胎盤中的表達(dá)調(diào)節(jié)研究姓名：姜麗萍申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：曹貴方吳巖20090401為了探討NO釋放量及NOS活力在正常妊娠各期的變化規(guī)律，其變化規(guī)律與Ghrelin、VEGF的變化是否有關(guān)，采用硝酸鹽還原酶法檢測了NO、NOS在正常妊娠各期的釋放水平的變化，結(jié)果提示：NO釋放含量及NOS活力在正常妊娠各期呈現(xiàn)規(guī)律性變化，即在妊娠早期910周

2、，妊娠1620周、妊娠3138周出現(xiàn)三次高峰，提示：NO和NOS釋放量與Ghrelin、VEGF、Flt1的表達(dá)有相關(guān)性，而孕晚期高峰的出現(xiàn)可能與分娩啟動與子宮平滑肌松弛有關(guān)，可能由其他的調(diào)節(jié)機(jī)制影響。3反義抑帛lJGhrelin對VEGF、Fit1蛋白及mRNA表達(dá)以及NO、NOS釋放水平的影響為了進(jìn)一步驗(yàn)證Ghrelin、VEGF、Fit1在胎盤血管形成發(fā)育過程中相互作用機(jī)制，利用反義寡核苷酸技術(shù)反義抑錆J]Ghrelin轉(zhuǎn)錄，從細(xì)

3、胞水平檢測Ghrel锨寸體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Humanumbilicalveinendothelialcells，HUVEC)中VEGF及其受體Fit1蛋白及mRNA表達(dá)以及NO、NOS釋放水平的影響，通過改變體外培養(yǎng)的反義寡核苷酸濃度和培養(yǎng)的不同時間確定最佳抑帶1]Ghrelin條件為：濃度20umol／L、培養(yǎng)時間：36h。有效抑制Ghrelin轉(zhuǎn)錄，檢測GhreliI測‘HUvEC中VEGF、Fit1蛋白和mRNA表達(dá)的影

4、響。結(jié)果顯示：反義抑制Ghrelin后VEGF、Flt1蛋白和mRNA的表達(dá)均下降，與空白對照組和SCON組比較均有顯著性差異(pO05)；NO釋放量與NOS活力在反義抑帶lJGhrelin后釋放水平也顯著下降(p005)。體外研究證明，反義抑制mⅣECGhrelin后可下調(diào)VEGF，F(xiàn)it1蛋白和mRNA的表達(dá)，同時下調(diào)NO釋放量和NOS活力水平。4在以上實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，為探討Ghrelin在PIH孕婦發(fā)病過程中的作用，聯(lián)合采用免疫組化

5、法、RQPCR、硝酸鹽還原酶法技術(shù)檢測了Ghrelin、VEGF、Flt1及NO、NOS在正常孕婦與PIH孕婦胎盤的表達(dá)情況。結(jié)果證實(shí)：PIH孕婦胎盤組織中Ghrelin，VEGF、Flt1蛋白和mRNA水平下降與正常孕婦比較有顯著性差異(pO05)；提示在PIH發(fā)病過程中Ghrelin可能對VEGF，F(xiàn)it1蛋白和mRNA的表達(dá)具有下調(diào)作用，進(jìn)而影響胎盤血管網(wǎng)的形成和發(fā)育；NO含量與NOS活力水平在PIH孕婦胎盤組織中下降，提示Ghr

6、eIin可能通過下調(diào)VEGF的表達(dá)進(jìn)一步影響血管舒張因子NO水平下降，進(jìn)而引起胎盤血管痙攣，血壓升高，最終導(dǎo)致PIH的發(fā)生?！C合以上分析，本研究利用免疫組化、實(shí)時熒光定量PCR、細(xì)胞培養(yǎng)、反義寡核苷酸、硝酸鹽還原酶技術(shù)檢測了Ghrelin、VEGF、Fit1及NO、NOS在正常妊娠與PIH孕婦胎盤以及反義抑NGhrelin體外培養(yǎng)HUVEC中的表達(dá)情況，研究結(jié)果充分表明：Ghrelin與VEGF、Fit1及NO、NOS在正常妊娠各階段