實驗性癲癇發(fā)作后海馬結(jié)構(gòu)GABAB受體亞單位表達變化及其激動劑影響的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文對海人酸(KA)誘導(dǎo)大鼠顳葉EP發(fā)作后海馬結(jié)構(gòu)2種GABAB-R亞單位即GBRla和GBR2的變化進行探討,以了解顳葉EP上GABAB-R亞單位作用和可能的適應(yīng)性變化,為進一步明確顳葉EP發(fā)病的受體分子生物學(xué)機制奠定基礎(chǔ)。 一、腦內(nèi)局部給藥建立海人酸顳葉癲癇模型的研究。 目的:探討腦內(nèi)局部給藥建立顳葉EP模型方法,為以后的顳葉EP研究奠定基礎(chǔ)。 方法:通過立體定向技術(shù)向大鼠海馬局部注射海人酸4p.1/kg,觀

2、察注射后大鼠的行為學(xué)、腦電圖和病理學(xué)改變。 結(jié)果:KA注入海馬后大鼠表現(xiàn)為凝視、濕狗樣抖動、咀嚼運動、點頭、肢體陣攣等;隨后出現(xiàn)陣發(fā)性旋轉(zhuǎn)、向上竄跳、四肢抽搐,反復(fù)間歇發(fā)作約lOh后發(fā)作停止。以后每周約自發(fā)性發(fā)作1-3次,主要為II級~IV級;同時,EP發(fā)作后大鼠防衛(wèi)反應(yīng)級別高,存在明顯的易激惹表現(xiàn)。EEG記錄到大腦皮質(zhì)叢集放電,棘波或尖波持續(xù)發(fā)放。病理形態(tài)學(xué)上觀察到KA注射側(cè)海馬結(jié)構(gòu)普遍受損,以CA3區(qū)最嚴(yán)重,齒狀回(DG)最

3、輕。KA注射對側(cè)神經(jīng)元受損明顯輕于KA注射側(cè),存在明顯單側(cè)病灶的病理改變。 結(jié)論:大鼠腦內(nèi)局部注射ICA可成功建立顳葉EP模型,其行為癥狀、電生理及海馬病理學(xué)改變類似人類顳葉EP,且化學(xué)點燃成功率高,重復(fù)性好,局部給藥較系統(tǒng)給藥具有許多優(yōu)點,是研究顳葉EP發(fā)病機制及篩選抗癇藥的理想模型。 二、GABAB受體亞單位在顳葉癲癇大鼠海馬結(jié)構(gòu)的表達變化。 目的:探討KA顳葉EP發(fā)作后2種GABAB-R亞單位即GBRla和

4、GBR2的動態(tài)變化,以進一步了解顳葉EP發(fā)病的受體分子生物學(xué)機制。同時,探討GABAs-R激動劑巴氯芬(baclofen,BLF)對顳葉EP海馬結(jié)構(gòu)GABAB-R亞單位的作用及其意義,為篩選作用于該類亞單位水平的新型抗癇藥提供依據(jù)。 方法:在腦內(nèi)局部注射KA建立顳葉EP模型的基礎(chǔ)上,應(yīng)用原位雜交技術(shù),在基因水平上,檢測海馬結(jié)構(gòu)各亞區(qū)、不同時程的2種亞單位mRNA表達及其單個殘存細胞mRNA表達的變化;應(yīng)用免疫組化分析方法,在蛋白

5、水平上,檢測海馬結(jié)構(gòu)各亞區(qū)及顳葉皮層不同時程的2種亞單位表達的變化;同時,應(yīng)用原位雜交技術(shù),檢測GABAB-R激動劑BLF干預(yù)后2種亞單位基因表達的變化。 結(jié)果: (1)KA注射側(cè)海馬結(jié)構(gòu)殘存細胞明顯減少,以CA3區(qū)細胞缺失最多,致癇7d時缺失量已大于85%,且膠質(zhì)細胞增多:其次以CAl區(qū)神經(jīng)元缺失明顯,致癇7d后缺失量在50%以上:DG區(qū)細胞缺失量最少,此外,KA注射側(cè)殘存細胞數(shù)明顯少于ICA注射對側(cè),顯示了KA注射側(cè)

6、明顯的單側(cè)病灶。隨著時間的推移,致癇組病理改變逐漸加重,注射側(cè)殘存正常細胞進一步減少。 (2)ICA致癇早期(6h-12h),2種單位mRNA表達水平廣泛下降,以后CAI和CA3區(qū)表達持續(xù)低下,但有逐漸表達增加的趨勢:DG區(qū)表達暫時性下降后很快回升;單個殘存正常細胞數(shù)的亞單位mRNA表達則明顯增加,尤其CA3區(qū)2種亞單位表達水平上調(diào)明顯。 (3)ICA致癇早期海馬結(jié)構(gòu)2種亞單位免疫反應(yīng)未見明顯改變,隨后CAl和CA3區(qū)逐

7、漸表達下降而處于表達低水平,與神經(jīng)元變性一致。DG區(qū)和顳葉皮層的2種亞單位表達很快恢復(fù)且增加明顯。此外,2種亞單位蛋白表達變化基本一致,但與其對應(yīng)的mRNA表達不完全同步。 (4)BLF干預(yù)后使2種亞單位表達明顯下降的時間點延遲,且表達下降幅度小于非干預(yù)的致癇組;在CAI與CA3區(qū)2種亞單位表達下降最明顯時,干預(yù)組表達水平明顯高于非干預(yù)的致癇組。 結(jié)論: (1)KA注射側(cè)海馬結(jié)構(gòu)殘存正常細胞數(shù)普遍減少,且明顯少于

8、KA注射對側(cè),這種明顯單側(cè)病灶的病理改變比系統(tǒng)給藥建立的雙側(cè)同等程度損害的EP模型更接近人類顳葉EP。隨著時間的推移,致病組殘存正常細胞數(shù)進一步減少,提示EP早期抗損傷的腦保護治療不僅有利于挽救受損的神經(jīng)元,而且有利于控制EP發(fā)作,應(yīng)具有十分重要意義。 (2)KA致癇后CAl和CA3區(qū)2種亞單位mRNA表達持續(xù)低下,早期為GABA活性降低,客觀上促進了EP的產(chǎn)生及擴展,隨后的持續(xù)性下降為KA很強的神經(jīng)損害致海馬區(qū)神經(jīng)元缺失所致;

9、糾正海馬結(jié)構(gòu)神經(jīng)元缺失后,單個殘存正常細胞數(shù)的mRNA表達明顯增加,尤其CA3區(qū)。這種亞單位表達水平的上調(diào),可增強突觸前谷氨酸能神經(jīng)元異源受體即GABAB-R的功能(減少谷氨酸釋放)及突觸后膜抑制功能,以彌補該區(qū)神經(jīng)元缺失所致的GABAB-R介導(dǎo)的功能缺失,此可能為顳葉EP的內(nèi)源性自我保護機制。 (3)2種亞單位免疫反應(yīng)的改變提示了機體對神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)過度興奮的適應(yīng)性反應(yīng)。此外,2種亞單位蛋白表達與其對應(yīng)的mRNA表達不完全同步,提示

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