SPHK1和HIF-1a蛋白共表達(dá)與胃癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移和預(yù)后相關(guān)性的研究.pdf

1、目的:本研究采用免疫組化方法,通過檢測正常胃黏膜、慢性萎縮性胃炎、腸上皮化生、異型增生及胃癌組織中SPHK1和HIF-1α蛋白的表達(dá),分析兩者表達(dá)的差異性和相關(guān)性,并探討二者表達(dá)與胃癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移及患者臨床預(yù)后之間的關(guān)系和臨床病理意義。
　　 方法:臨床病例資料收集及組織芯片制作:收集中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤外科手術(shù)切除胃癌標(biāo)本254例(其中205例距癌灶邊緣大于5cm處取配對(duì)正常胃黏膜作為對(duì)照),慢性萎縮性胃炎43例,腸上皮

2、化生107例及異型增生17例。常規(guī)石蠟包埋,組織蠟塊行4μm組織切片,常規(guī)HE染色,用于目標(biāo)組織的定位。采用組織芯片制作儀構(gòu)建胃癌及癌前病變組織芯片蠟塊,行4μm連續(xù)切片。
　　 免疫組化染色及結(jié)果判定方法:采用PV-9000免疫組化二步法檢測正常胃黏膜、慢性萎縮性胃炎、腸上皮化生、異型增生及胃癌中SPHK1和HIF-1α蛋白的表達(dá)。兔抗人SPHK1多克隆抗體購自美國Abgent公司,工作濃度為1:100,鼠抗人HIF-1α單克

3、隆抗體購自Santa Crzu公司,工作濃度1:20,免疫組化及DAB顯色試劑盒購自北京中杉金橋生物有限公司。用PBS代替一抗做陰性對(duì)照。結(jié)果判定:SPHK1和HIF-1α蛋白在細(xì)胞漿呈現(xiàn)清晰棕黃色特異性免疫反應(yīng)顆粒為陽性細(xì)胞。每一病例隨機(jī)選擇2個(gè)高倍鏡視野,計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞,陽性細(xì)胞占計(jì)數(shù)同類細(xì)胞百分率＜5％為0分,5％～25％為1分,26％～50％為2分,51％～75％為3分,＞75％為4分。染色強(qiáng)度以陽性細(xì)胞呈色反應(yīng)為準(zhǔn):無特異著

4、色為0分,淺黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分;然后按染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞所占的百分比的乘積將結(jié)果分為:0分為陰性(-);1～4分為弱陽性(+);5～8分為中度陽性(++),9～12分為強(qiáng)陽性(+++)。
　　 結(jié)果:SPHK1蛋白在慢性萎縮性胃炎(41.9％)、腸上皮化生(59.8％)、異型增生(82.4％)和胃癌組織(60.6％)中表達(dá)的陽性率均顯著高于正常胃黏膜(22％)。SPHK1蛋白的陽性表達(dá)率在腸上皮化生、異型增生

5、及胃癌各組之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。胃癌Borrmann分型中SPHK1在Ⅲ、Ⅳ型的陽性表達(dá)率(64.2％)顯著高于Ⅰ、Ⅱ型的陽性表達(dá)率(42.9％);淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌組SPHK1蛋白陽性表達(dá)率(65％)顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(50.6％)。SPHK1表達(dá)與胃癌患者性別、年齡、WHO組織學(xué)分型、Lauren分型及浸潤深度未見相關(guān)。
　　 HIF-1α蛋白在慢性萎縮性胃炎(39.5％)、異型增生(82.4％)和胃癌組織(65.4％,)

6、中表達(dá)的陽性率均顯著高于正常胃黏膜(24.9％),HIF-1α蛋白的陽性表達(dá)率在腸上皮化生、異型增生及胃癌各組之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。胃癌Borrmann分型中HIF-1α蛋白在Ⅲ、Ⅳ型的陽性表達(dá)率(69.8％)顯著高于Ⅰ、Ⅱ型的陽性表達(dá)率(42.9％);淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移HIF-1α蛋白胃癌組陽性表達(dá)率(70.6％)顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(53.2％)。而與胃癌患者性別、年齡、WHO組織學(xué)分型、Lauren分型和浸潤深度未見相關(guān)。
　　

7、 SPHK1和HIF-1α蛋白在254例胃癌組織中表達(dá)呈正相關(guān)。SVHK1+/HIF-1α+患者的五年生存率(49.6％)顯著低于SPHK1-/HIF-1α-患者五年生存率(50.0％),生存時(shí)間分別為31.0±2.586 months和46.0±2.678months,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:SPHK1和HIF-1α在胃癌和癌前病變中的過表達(dá)提示其在胃癌發(fā)生、浸潤和轉(zhuǎn)移過程中起重要的作用,兩者可一同成為胃癌診斷和預(yù)警