缺鐵脅迫下小金海棠根特異蛋白的表達(dá)鑒定及MxSAMS基因克隆.pdf

1、本試驗(yàn)以蘋果屬小金海棠為試材，利用蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法，研究了在缺鐵脅迫下小金海棠根部蛋白質(zhì)表達(dá)模式的變化情況，通過(guò)質(zhì)譜測(cè)定了5個(gè)發(fā)生變化的蛋白點(diǎn)，根據(jù)肽指紋譜鑒定了其中的2個(gè)蛋白，都屬于S-腺苷甲硫氨酸(SAMS)合成酶家族。利用RACE方法克隆了小金海棠的MxSAMS基因，主要結(jié)果如下：　　經(jīng)過(guò)0μM和4μM鐵水平處理，小金海棠根部蛋白SDS-PAGE電泳分析，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)特異條帶；但0μM鐵處理第10天的葉片中一條大約40KDa的蛋白

2、加強(qiáng)表達(dá)，在4μM鐵處理葉片中，這個(gè)40KDa的蛋白在2-8天下調(diào)，到第10天恢復(fù)，另外一條42KDa左右的蛋白在第4-8天加強(qiáng)表達(dá)，到第10天恢復(fù)。這些結(jié)果表明，低鐵和缺鐵處理引起了小金海棠葉片蛋白含量和成分的變化?！　⊥ㄟ^(guò)對(duì)雙向電泳圖譜分析，小金海棠根部蛋白表達(dá)模式發(fā)生變化，在不同的處理時(shí)間，不同的蛋白表現(xiàn)出上調(diào)或下調(diào)作用，但沒(méi)有發(fā)現(xiàn)特異蛋白的表達(dá)。根據(jù)2-DE圖譜，選取了5個(gè)蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜測(cè)定，根據(jù)得到的肽質(zhì)量指紋譜(PMF)檢

3、索，鑒定了其中的2個(gè)蛋白，它們都屬于S-腺苷甲硫氨酸合成酶家族，具有催化ATP和甲硫氨酸(Met)合成S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的作用。由于他們的PMF不同，推測(cè)他們是同一個(gè)SAM家族的同源蛋白，行使不同的功能。另外3個(gè)蛋白沒(méi)有得到鑒定，可能是未知蛋白。　　克隆得到小金海棠S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因(MxSAMS)，cDNA全長(zhǎng)1479bp，ORF1176bp，編碼一個(gè)392個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì)，具有SAMS家族的結(jié)構(gòu)特征，分子量約為