水稻種子特異表達基因SCP46的克隆及功能鑒定.pdf

1、種子作為水稻最重要的經(jīng)濟器官和遺傳器官，其形態(tài)的變化將直接影響水稻產(chǎn)量和品質(zhì)。在當前的研究當中，通過反向遺傳策略，從基因特異的表達模式入手來研究基因的功能的方法，已經(jīng)得到了普遍的認可和應用。然而，在已存在的大量水稻種子特異表達基因當中，有關(guān)其基因功能的研究卻不是很多。基于現(xiàn)狀，我們選擇了44個水稻種子特異表達的基因，通過反向遺傳學的研究策略，對該基因進行表達抑制，并通過對突變體種子性狀的多代多株系的考察和驗證，預測基因可能行使的特定功能

2、。通過原位雜交、實時熒光定量PCR、酵母雙雜交、RNA-seq等試驗找出其上下游的調(diào)控基因和互作蛋白，從而補充了水稻種子生物發(fā)育過程中的調(diào)控網(wǎng)絡。
　　絲氨酸羧肽酶SCP(Serine carboxypeptidase)是植物體中較大的一類在蛋白質(zhì)加工成熟過程中催化蛋白質(zhì)水解的酶，但是，在目前的研究中，對于水稻SCP功能的報道卻很少。通過對水稻當中存在的59個SCPs基因家族成員的基因結(jié)構(gòu)和表達譜的鑒定，發(fā)現(xiàn)SCP46在發(fā)育中的種

3、子中特異性的表達。原位雜交結(jié)果顯示在水稻種子的胚、胚乳和糊粉層中特異性表達。同時SCP46基因能被ABA誘導表達。對于其干擾突變體和野生型的表型的鑒定，發(fā)現(xiàn)在scp46干擾突變體中，其種子變小且休眠增強。scp46突變體種子在萌發(fā)時表現(xiàn)出對ABA的抑制作用更加敏感相較于野生型而言，這些證據(jù)說明了SCP46參與了ABA的信號轉(zhuǎn)導。通過對RNA-seq和qRT-PCR結(jié)果的分析，很多灌漿和休眠相關(guān)的基因，例如SP、VP1和AGPs等，都在s