IL-27對(duì)U937細(xì)胞的生物學(xué)行為的影響.pdf

1、白細(xì)胞介素-27(interleukine27，IL-27)是2002年發(fā)現(xiàn)并命名的一種新的細(xì)胞因子，它與IL-12以及另一種新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子IL-23共同組成IL-12分子家族，具有復(fù)雜的生物學(xué)功能，在抗感染免疫、抗腫瘤免疫、自身免疫病中發(fā)揮著重要的作用。
　　 IL-27作為IL-12家族的成員，其抗腫瘤作用一直是廣大學(xué)者關(guān)注的焦點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)IL-27可以通過(guò)許多不同的機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用，包括CD8+T細(xì)胞的特異性殺傷、誘導(dǎo)

2、機(jī)體細(xì)胞分泌IFN-γ、抑制血管生成、活化NK細(xì)胞；最近有研究證實(shí)，IL-27可以不依賴免疫細(xì)胞發(fā)揮直接的抗腫瘤作用，這些實(shí)驗(yàn)證據(jù)都提示了IL-27可以作為一種新的有效的抗腫瘤藥物。
　　 目前，IL-27的抗腫瘤作用的研究主要是在實(shí)體瘤方面。而IL-27對(duì)血液學(xué)腫瘤的作用機(jī)制尚不清楚。我們前期的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，IL-27受體WSX-1和gp130在AML尤其在AML-M5(急性單核細(xì)胞白血病)病人高表達(dá)，用人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)

3、胞株U937為研究對(duì)象，我們發(fā)現(xiàn)rhIL-27能夠誘導(dǎo)U937細(xì)胞產(chǎn)生抗腫瘤性細(xì)胞因子TNF-α和IL-12，抑制U937細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。本研究就是在前期實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討IL-27的抗腫瘤作用機(jī)制。
　　 研究目的：
　　 一、了解rhIL-27對(duì)U937細(xì)胞增殖的影響；
　　 二、檢測(cè)rhIL-27對(duì)U937細(xì)胞中促凋亡基因bax、p53的mRNA水平表達(dá)的影響；及對(duì)U937細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白ca

4、spase3的表達(dá)和活性的影響；
　　 三、檢測(cè)rhIL-27對(duì)U937細(xì)胞中的MHCⅠ類分子，協(xié)同刺激分子CD86和黏附分子CD54表達(dá)的影響；
　　 實(shí)驗(yàn)方法：
　　 一、MTT比色法測(cè)定細(xì)胞的增殖抑制率；
　　 二、以不同濃度的rhIL-27刺激U937細(xì)胞，TRIzol法提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，分別采用熒光定量PCR，RT-PCR測(cè)定caspase3，Bax，P53的mRNA表達(dá)水平；cas

5、pase3活性試劑盒測(cè)定casp3的活性，
　　 三、熒光定量PCR法測(cè)定MHCⅠ類分子(HLA-A，HLA-B，HLA-C，)及β2微球蛋白和CD86，CD54的表達(dá)，流式細(xì)胞檢測(cè)CD86，CD54在細(xì)胞表面的表達(dá)。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 一、MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，rhIL-27能顯著影響U937細(xì)胞的增殖(以阿糖胞苷為陽(yáng)性對(duì)照)，并且可以和阿糖胞苷產(chǎn)生協(xié)同的增殖抑制作用；
　　 二、PCR及熒光定量P

6、CR結(jié)果顯示：rhIL-27可以顯著誘導(dǎo)U937細(xì)胞中促凋亡基因Bax、P53的表達(dá)(P＜0.01)，并呈現(xiàn)劑量相關(guān)性，在劑量較小的時(shí)候隨著rhIL-27濃度的增加而增加，濃度為40ng/ml時(shí)，作用最大；rhIL-27還可以誘導(dǎo)U937細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白caspase3 mRNA水平的表達(dá)，增加caspase3的活性，與rhIL-27濃度及處理時(shí)間有關(guān)，濃度為40ng/ml，作用48小時(shí)達(dá)到最大，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比具有顯著性差異(P＜

7、0.05)；
　　 三、rhIL-27可以誘導(dǎo)U937細(xì)胞中MHCⅠ類分子(HLA-A、B、C)、β2微球蛋白、協(xié)同刺激分子CD86及CD54的表達(dá)，在rhIL-27濃度為40mg/ml時(shí)，作用達(dá)到最大；
　　 結(jié)論：
　　 1.rhIL-27直接抑制U937細(xì)胞的增殖，還可以和阿糖胞苷產(chǎn)生協(xié)同的U937細(xì)胞增殖抑作用；
　　 2.rhIL-27可以誘導(dǎo)U937細(xì)胞促凋亡基因Bax、p53的mRNA水平的

8、表達(dá)增加，從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞中凋亡通路的激活，提示：U937細(xì)胞的增殖抑制可能是由于凋亡途徑的激活所致；凋亡下游信號(hào)蛋白caspase3表達(dá)和活性的測(cè)定，進(jìn)一步證實(shí)rhIL-27可以誘導(dǎo)U937細(xì)胞凋亡，產(chǎn)生增殖抑制。
　　 3.rhIL-27可以誘導(dǎo)U937細(xì)胞中提呈內(nèi)源性抗原的MHCⅠ類分子的表達(dá)，增加了腫瘤細(xì)胞對(duì)CTL的敏感性；rhIL-27可以誘導(dǎo)U937細(xì)胞表面的CD86、CD54的表達(dá)，為CTL和腫瘤細(xì)胞的識(shí)別提供協(xié)同