U937巨噬細(xì)胞對SW872脂肪細(xì)胞糖脂代謝、炎癥細(xì)胞因子分泌、增殖及凋亡的影響.pdf

1、第一部分、SW872前脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化。 目的：觀察油酸對SW872脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用，分別建立成熟脂肪細(xì)胞模型及U937巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)模型。 方法：采用不同濃度油酸誘導(dǎo)前脂肪細(xì)胞成熟分化，光學(xué)顯微鏡觀察SW872前脂肪細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，即細(xì)胞內(nèi)脂滴的形成，油紅O染色觀察胞漿中脂滴的聚集，化學(xué)比色法測定細(xì)胞中甘油三酯的總量。最后與U937巨噬細(xì)胞混合培養(yǎng)。 結(jié)果： 1．油酸誘導(dǎo)分化24h時(shí)，SW872

2、細(xì)胞胞體由小變大，形態(tài)由梭形變?yōu)閳A形，胞漿中出現(xiàn)細(xì)小的脂滴；誘導(dǎo)分化48h時(shí)，細(xì)胞體積進(jìn)一步變大，幾乎所有細(xì)胞形態(tài)變圓，胞漿中脂滴明顯增多；誘導(dǎo)分化72h時(shí)，細(xì)胞呈戒環(huán)狀，胞漿脂滴含量更多，油紅O染色胞漿中可見豐富的脂肪染色。 2．油酸誘導(dǎo)分化刺激24h時(shí)，細(xì)胞中甘油三酯總量增多；0.6mM誘導(dǎo)分化刺激48h時(shí)，甘油三酯總量是分化前的8.5倍（p<0.01）；誘導(dǎo)分化刺激72h時(shí)，甘油三酯總量是分化前的14倍（p<0.01）。隨

3、著油酸誘導(dǎo)濃度的升高，細(xì)胞中甘油三酯含量增加也更加迅速。 結(jié)論：油酸刺激能成功地將SW872前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化為典型的成熟脂肪細(xì)胞。 第二部分、U937巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)對SW872糖脂代謝及炎癥狀態(tài)的影響。 目的：觀察U937巨噬細(xì)胞與SW872脂肪細(xì)胞共培養(yǎng)對脂肪細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)和其炎癥因子分泌水平的影響，探討炎癥狀態(tài)與脂肪細(xì)胞胰島素抵抗的關(guān)系及其機(jī)制。 方法： 1．采用[3H]-2-DG摻入法，觀

4、察基礎(chǔ)狀態(tài)及胰島素刺激下，不同油酸濃度及巨噬細(xì)胞混合培養(yǎng)對SW872脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取率的影響。 2．采用RT-PCR方法，測定不同油酸濃度及巨噬細(xì)胞混合配額樣對SW872脂肪細(xì)胞和巨噬細(xì)胞TNF-α、MCP-1、Visfatin基因表達(dá)水平的影響。 3．采用ELISE方法，測定不同油酸濃度及巨噬細(xì)胞混合配額樣對SW872脂肪細(xì)胞和巨噬細(xì)胞TNF-α、MCP-1、Visfatin分泌水平的影響。 結(jié)果：油酸誘導(dǎo)濃

5、度0mmol/L至0.6mmol/L時(shí)，脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取率呈升高趨勢，0.8至1.2mmol/L時(shí)葡萄糖攝取率逐漸下降，但隨著油酸誘導(dǎo)濃度的增加，TNF-α、MCP-1分泌及Visfatin基因表達(dá)水平均明顯升高。在與巨噬細(xì)胞混合培養(yǎng)后，TNF-α、MCP-1分泌Visfatin基因表達(dá)水平進(jìn)一步升高，而各組葡萄糖攝取率均受到抑制。同時(shí)巨噬細(xì)胞在混合培養(yǎng)前后，其自身炎癥狀態(tài)也同時(shí)升高。 結(jié)論：油酸誘導(dǎo)SW872前脂肪細(xì)胞成熟分

6、化，在高脂負(fù)荷下，不但造成了胰島素抵抗，而且導(dǎo)致炎癥因子水平急劇升高，巨噬細(xì)胞的趨化加重了脂肪細(xì)胞炎癥狀態(tài)負(fù)荷，進(jìn)一步抑制了葡萄糖攝取，削弱胰島素敏感性。 第三部分、U937巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)對SW872增殖及凋亡的影響。 目的：觀察U937巨噬細(xì)胞與SW872脂肪細(xì)胞共培養(yǎng)狀態(tài)下，對脂肪細(xì)胞增殖及凋亡的影響，探討巨噬細(xì)胞在脂肪細(xì)胞胰島素抵抗形成中的意義。 方法： １.利用四甲基偶氮唑鹽比色法（MTT）檢測U

7、937巨噬細(xì)胞對SW872前脂肪細(xì)胞增殖的影響， ２.采用流式細(xì)胞學(xué)（FCM）手段檢測各組脂肪細(xì)胞在不同炎性反應(yīng)狀態(tài)下對細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果：隨著油酸誘導(dǎo)濃度的增加及SW872前脂肪細(xì)胞分化成熟，脂肪細(xì)胞凋亡率亦逐漸增加（P<0.05）；在與U937巨噬細(xì)胞混合培養(yǎng)后，炎癥狀態(tài)改變對各脂肪細(xì)胞組混合培養(yǎng)前后的凋亡率無明顯影響(P>0.05)；U937巨噬細(xì)胞的混合培養(yǎng)對SW872前脂肪細(xì)胞的增殖率有明顯抑制作用(P<0