中藥聯(lián)合克羅米芬治療多囊卵巢綜合征大鼠的實驗研究.pdf

1、第一部分、多囊卵巢綜合征大鼠模型的建立
　　 目的：通過比較兩種造模方法選擇較理想的多囊卵巢綜合征(PCOS)大鼠模型。
　　 方法：將40 只清潔級6周齡雌性SD大鼠隨機分為正常對照1組、模型1組、正常對照2組和模型2組，正常對照1組灌服1％羧甲基纖維素，模型1組采用來曲唑(Letrozole)溶于1％羧甲基纖維素進行灌胃造模，兩組連續(xù)灌服21天；正常對照2組給予生理鹽水皮下注射，第1～10天每日1次，第11～22天每

2、日2次；模型2組采用HCG 聯(lián)合胰島素造模，第1～22天給予胰島素皮下注射，每日1次，第11～22天給予人絨毛膜促性腺激素(HCG)皮下注射，每日2次。干預期間每日陰道涂片觀察大鼠動情周期，于干預完次日處死大鼠，肉眼觀察大鼠卵巢外形，并稱取卵巢重量，用放免法(RIA)檢測血清激素水平，卵巢組織學切片觀察卵泡改變及排卵情況。
　　 結(jié)果：陰道涂片顯示模型1組所有大鼠失去穩(wěn)定的動情周期，均處于間期，大鼠體質(zhì)量增加，雙側(cè)卵巢重量增加，

3、卵巢白膜增厚，卵巢呈多囊樣改變，黃體數(shù)目顯著減少，囊性擴張卵泡率為73.23％，卵泡內(nèi)顆粒細胞層數(shù)減少，卵泡膜細胞增多，與正常對照1組相比有顯著性差異(P＜0.01)，模型1組血清T、LH、FINS 水平均明顯高于正常對照1組(P＜0.05)，P 水平顯著低于正常對照1組(P＜0.05)，F(xiàn)SH 與正常對照1組相比差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。模型2組70％大鼠陰道涂片顯示動情周期紊亂，大鼠體質(zhì)量增加，雙側(cè)卵巢重量增加，黃體數(shù)目減

4、少，模型2組多數(shù)大鼠卵巢呈囊樣改變，囊性擴張卵泡率為54.29％，其囊泡體積大，囊泡數(shù)目少于模型1組，卵泡內(nèi)顆粒細胞層數(shù)減少，卵泡膜細胞增多，與正常對照2組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；模型2組血清LH、INS 水平顯著高于對照2組(P＜0.05)，血清T、P 水平較正常對照2組有升高趨勢但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：根據(jù)鹿特丹多囊卵巢綜合征診斷依據(jù)，從血清激素水平和卵巢組織切片等方面比較可以看出運用

5、來曲唑誘導的PCOS大鼠模型優(yōu)于HCG 聯(lián)合胰島素誘導的該模型。
　　 第二部分、中藥聯(lián)合克羅米芬對PCOS大鼠卵巢細胞凋亡相關(guān)蛋白和瘦素受體表達的影響
　　 目的：觀察中藥聯(lián)合克羅米芬對PCOS大鼠血清性激素水平和卵巢凋亡因子Bax、Bcl-2及瘦素受體表達的影響，初步探討中藥聯(lián)合克羅米芬治療的作用機制。
　　 方法：將來曲唑(Letrozole)誘導的多囊卵巢綜合征大鼠隨機分為模型組(M)、中藥組(Z)、西藥

6、組(X)、中西醫(yī)組(Z+X)，每組10 只，另有正常對照組(N)10 只。干預期間各治療組均以半劑量來曲唑灌胃來維持模型。模型組和正常對照組予以生理鹽水1 ml/250 g/d 灌胃；中藥組予以生藥含量12.2 g/kg/d的中藥灌胃；西藥組予以克羅米芬4.5 mg/kg/d 灌胃；中西醫(yī)組予以中藥和克羅米芬聯(lián)合灌胃；各組干預時間為兩周。
　　 稱取各組大鼠卵巢重量，通過卵巢組織學切片觀察各級卵泡發(fā)育情況，放免法檢測血清激素水平

7、，免疫組化法及RT-PCR法分別檢測各組大鼠卵巢凋亡因子Bax、Bcl-2及卵巢Leptin-R mRNA表達的差異。
　　 結(jié)果：與正常對照組相比，模型組血清T、LH、FINS 水平顯著升高(P＜0.01)，而血清FSH 水平顯著降低(P＜0.01)，模型組卵巢Bax表達量顯著升高(P＜0.05)而Bcl-2表達顯著降低(P＜0.05)，模型組卵巢瘦素受體表達量顯著上調(diào)(P＜0.05)；與模型組相比，中藥組、西藥組和中西醫(yī)組血

8、清T、FINS 均顯著降低(P＜0.01)，中藥組血清LH 較模型組顯著降低(P＜0.05)，中藥組、西藥組和中西醫(yī)組血清FSH 水平較模型組顯著升高(P＜0.05)。與模型組相比，中藥組、西藥組和中西醫(yī)組卵巢內(nèi)Bax表達顯著降低(P＜0.05)而Bcl-2表達顯著上調(diào)(P＜0.05)，且中西醫(yī)組表達更接近正常對照組，中藥組、西藥組和中西醫(yī)組卵巢瘦素受體表達量顯著下降(P＜0.05)，并且和其他干預組相比，中西醫(yī)組表達量下調(diào)最多(P＜0