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文檔簡介
1、目的:探討1型多聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose) polymerase-1]通過激活NF-κB途徑調(diào)節(jié)體外培養(yǎng)乳鼠心臟成纖維細胞MMP-2,MMP-9 酶活性的機制。
方法:使用10μmol/L去甲腎上腺素(NE)刺激體外培養(yǎng)的乳鼠心臟成纖維細胞24小時,利用熒光基團DCF-DA檢測心臟成纖維細胞內(nèi)活性氧水平,使用明膠酶譜法檢測MMP-2,MMP-9的酶活性水平,凝膠阻滯遷移實驗檢測各組NF-κB的DN
2、A 結(jié)合能力,western-bloT檢測PARP-1蛋白表達水平;使用PARP-1 抑制劑3-氨基苯甲酰胺(3-aminobenzamide,3AB),α、β受體阻滯劑及抗氧化劑vitC干預(yù)后,觀察上述指標的變化。
結(jié)果:去甲腎上腺素誘導(dǎo)心臟成纖維細胞內(nèi)ROS 產(chǎn)生增加,PARP-1蛋白表達增加,NF-κB的核轉(zhuǎn)錄能力明顯增強,MMP-2、MMP-9 酶活性明顯增加。使用3AB 抑制PARP-1 后,或用vitC及α、β
3、受體阻滯劑等預(yù)先處理后可顯著抑制NF-κB的DNA結(jié)合能力,MMP-2,MMP-9的活性也明顯降低。
結(jié)論:去甲腎上腺素通過使心臟成纖維細胞NF-κB的DNA 結(jié)合能力增高,從而使細胞分泌的MMP-2和MMP-9酶活性增高。去甲腎上腺通過激活活性氧進而活化PARP-1并促使其蛋白表達顯著增高。去甲腎上腺素是通過α、β受體來實現(xiàn)其上述效應(yīng)的。
PARP-1通過增強NF-κB的DNA 結(jié)合能力調(diào)控MMP-2和MM
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