干擾PRLR基因表達抑制人乳腺癌細胞增殖作用的研究.pdf

1、乳腺癌的病因學尚不十分清楚，遺傳、激素、免疫與各種環(huán)境因素相互作用，可能共同參與了乳腺癌的發(fā)生<'[1-3]>。同時，與其他腫瘤不同的是，乳腺是主要激素與眾多細胞因子反應組織器官，提示乳腺癌也是一個激素依賴性腫瘤。激素通過與特異性受體的結合而行使功能，隨著對乳腺組織中激素受體家族功能的深入研究和對乳腺癌發(fā)生、發(fā)展過程中分子機制的研究進展，人催乳素(Prolactin，PRL)和催乳素受體(Prolactin receptor，PRLR)

2、在乳腺生理、病理過程中的調控機制也重新引起人們的關注<'[4，5]>。在乳腺癌組織以及乳腺癌細胞系中，PRLR的表達明顯高于正常組織和細胞<'[6，7]>，并且，PRLR的降解程度與Ser349磷酸化水平下降，從而使得乳腺癌組織和細胞中PRLR的穩(wěn)定性增高<'[8]>，高水平的PRLR促進了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。因此，抑制或阻斷人．PRLR基因表達是探索乳腺癌分子治療的新思路。 本研究應用近年來發(fā)展起來的RNAi技術<'[9]>，特

3、異性抑制或下調PRLR基因的表達，并觀察其對人乳腺癌細胞的增殖抑制作用。我們首先設計并化學合成了三對靶向PRLR的小干擾RNA(smallinterfering RNA，siRNA)，以siRNA-GAPDH 作為陽性對照，non-scilencing siRNA作為陰性對照，脂質體將其轉染到高表達PRLR的人乳腺癌細胞MCF-7中，利用熒光定量PCR法檢測轉染后PRLR基因的相對表達量，發(fā)現(xiàn)轉染siRNA(終濃度為100 nM)后24

4、小時，與陰性對照組相比，GAPDH的表達被抑制68％，siRNA-PRLR1使得PRLR表達抑制達63％，從而成功篩選出有效的siRNA靶點序列。下續(xù)實驗中，我們以此靶點siRNA-PRLR1作為處理因素，光鏡下觀察細胞形態(tài)學的改變，MTT法檢測細胞增殖抑制率，流式細胞儀檢測細胞周期的變化，RT-PCR檢測細胞周期素D1(Cyclin D1，CCND1)表達的變化。結果發(fā)現(xiàn)：轉染siRNA-PRLR(100nM)后24小時，細胞增殖減慢