小干擾RNA靶向VEGF基因在體內(nèi)外抑制乳腺癌細(xì)胞增殖的研究.pdf

1、背景與目的：血管生成與腫瘤生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)能特異地促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖及遷移，在腫瘤新生血管生成過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用。通過(guò)RNA干擾技術(shù)(RANinterference，RNAi)抑制VEGF表達(dá)的抗血管生成療法可有效應(yīng)用于腫瘤治療。本課題采用化學(xué)修飾的小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)在

2、體內(nèi)外抑制VEGF基因表達(dá)，探討化學(xué)修飾的siRNA介導(dǎo)的RNAi在乳腺癌基因治療的可行性和特異性。 方法 選用陽(yáng)離子脂質(zhì)體Lipofectamine2000<'TM>作為轉(zhuǎn)染試劑，將針對(duì)人VEGF基因的siRNA轉(zhuǎn)染人類乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和裸鼠移植瘤，在體內(nèi)外誘導(dǎo)RNAi。采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)細(xì)胞增殖，Hoechst33258熒光染色觀察細(xì)胞凋亡情況，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcr

3、iption polymerase chain reaction，RT-PCR)及蛋白印跡試驗(yàn)(Western Blotting)檢測(cè)siRNA治療組和對(duì)照組VEGF,Bcl-2和Bax基因表達(dá)的變化。 結(jié)果 體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：靶向VEGF基因siRNA轉(zhuǎn)染乳腺癌MCF-7細(xì)胞后，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率達(dá)52.5％；Hoechst33258熒光染色顯示細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)凋亡小體；VEGF及Bcl-2 mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著降低(p<