SIRT3基因在乳腺癌中的表達(dá)及其對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖能力的影響.pdf

1、背景及目的：
　　乳腺癌是世界范圍內(nèi)女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，占總癌癥病例的23％和癌癥死亡病例的14%。在我國(guó)，乳腺癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，且趨于年輕化，是對(duì)婦女健康威脅最大的疾病之一。由于缺少相應(yīng)的篩查措施或治療手段不當(dāng)，我國(guó)乳腺癌的死亡率也逐漸升高。因此，深入探討乳腺癌的發(fā)病機(jī)理十分必要。隨著分子生物學(xué)機(jī)制在腫瘤學(xué)領(lǐng)域的更深入研究，分子靶向治療越來(lái)越多的展現(xiàn)出它獨(dú)有的優(yōu)勢(shì)。沉默信息調(diào)節(jié)因子家族（Sirtuins）被認(rèn)為在調(diào)

2、控衰老和壽命方面發(fā)揮重要作用。Sirtuins由7個(gè)成員組成，即SIRT1-SIRT7。SIRT3作為線粒體去乙酰化酶，是Sirtuins家族的重要成員。最近幾年的研究發(fā)現(xiàn)SIRT3不僅參與了機(jī)體壽命的調(diào)節(jié)，其在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中亦具非常重要的作用。近期研究發(fā)現(xiàn)：SIRT3在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)于癌旁組織顯著降低，且SIRT3高表達(dá)可使總生存期（OS）與RFS延長(zhǎng)。此外，SIRT3的高表達(dá)可以抑制細(xì)胞生長(zhǎng)并誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞的凋亡。在肺腺癌，

3、胃癌，胰腺癌中，SIRT3表達(dá)均下調(diào)，SIRT3的過(guò)表達(dá)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)并誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。與此結(jié)果相反，另有一些研究表明：在口腔鱗癌、食管癌、膀胱癌中SIRT3敲低顯著抑制腫瘤發(fā)生，起促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的作用。由此發(fā)現(xiàn)，SIRT3在不同類型腫瘤中的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。目前關(guān)于SIRT3在乳腺癌中作用的研究尚不完善，本實(shí)驗(yàn)以SIRT3為靶點(diǎn)，通過(guò)免疫組織化學(xué)測(cè)定其在乳腺癌組織中的表達(dá)情況，Western blot測(cè)定SIRT3在乳腺癌細(xì)胞的表達(dá)水

4、平，以及RT-PCR實(shí)驗(yàn)測(cè)定SIRT3分子在RNA水平的表達(dá)，從而探討SIRT3在乳腺癌疾病進(jìn)展中的作用；通過(guò)將SIRT3的表達(dá)情況與患者臨床病理特征進(jìn)行相關(guān)性分析及生存分析，探討 SIRT3與乳腺癌預(yù)后相關(guān)性；通過(guò)研究SIRT3基因的過(guò)表達(dá)與敲低條件下分別對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖能力的影響，探討SIRT3在癌細(xì)胞中的功能和性質(zhì)，從而探索SIRT3是否有望成為乳腺癌治療的潛在靶點(diǎn)。
　　方法：
　　1．應(yīng)用組織芯片技術(shù)，通過(guò)免疫組化

5、法檢測(cè)SITR3在乳腺癌組織及癌旁組織的表達(dá)，評(píng)價(jià)SIRT3在乳腺癌組織的表達(dá)情況，并分析SIRT3的表達(dá)與患者臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性。根據(jù)隨訪結(jié)果對(duì)所有病例進(jìn)行單因素及多因素生存分析，分析SIRT3的表達(dá)與乳腺癌患者預(yù)后的相關(guān)性。
　　2．應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，通過(guò)Western blot檢測(cè)SIRT3在乳腺癌細(xì)胞系EMT6，乳腺成纖維細(xì)胞系MEFs的蛋白表達(dá)水平。
　　3．通過(guò)熒光定量PCR檢測(cè)SIRT3 mRNA在乳腺癌細(xì)

6、胞系EMT6，乳腺成纖維細(xì)胞系MEFs的表達(dá)情況。
　　4．通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)觀察上調(diào)及下調(diào)SIRT3基因?qū)θ橄侔〦MT6細(xì)胞增殖能力的影響。
　　結(jié)果：
　　1、SIRT3在乳腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率84.72%(122/144)低于癌旁正常組織表達(dá)率96.63%(86/89)。兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.572, P＜0.05）。SIRT3在乳腺癌中的表達(dá)與患者下列臨床病理學(xué)特征存在相關(guān)性：年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期

7、、HER-2表達(dá)（P＜0.05）；然而，SIRT3的表達(dá)與病理分級(jí)、浸潤(rùn)深度、ER受體及PR受體的表達(dá)情況無(wú)關(guān)（P＞0.05）。單因素分析顯示：乳腺癌中SIRT3表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、HER-2表達(dá)情況與預(yù)后相關(guān)（P＜0.05）；多因素COX比例風(fēng)險(xiǎn)分析顯示SIRT3的表達(dá)情況及TNM分期均具有獨(dú)立的預(yù)后意義。
　　2、Western blot結(jié)果顯示：乳腺癌細(xì)胞中SIRT3的表達(dá)水平明顯降低。定量數(shù)據(jù)顯示：SIRT3在乳

8、腺癌細(xì)胞的相對(duì)表達(dá)量(0.220±0.173)明顯低于非癌性細(xì)胞(0.850±0.086)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.133, P=0.002，P＜0.01）。
　　3、RT-PCR結(jié)果顯示：SIRT3在乳腺癌細(xì)胞的mRNA水平較非癌性細(xì)胞明顯降低。SIRT3在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)水平(0.520±0.069）明顯低于非癌性細(xì)胞(0.886±0.034)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.729, P=0.009，P＜0.01）。