植物內(nèi)生真菌HCCB1621生物活性物質(zhì)的初步研究.pdf

1、植物內(nèi)生菌作為一個(gè)多樣性十分豐富的微生物類群，代謝產(chǎn)物非常豐富，包括殺蟲(chóng)、抗菌、抗腫瘤等活性物質(zhì)，是人們尋找新型抗菌、抗腫瘤藥物的重要資源。本論文利用上海來(lái)益生物藥物研發(fā)中心的植物內(nèi)生菌資源，通過(guò)各種模型的篩選，在獲得活性菌株的基礎(chǔ)上，對(duì)其中的一株進(jìn)行了菌種鑒定，并對(duì)它們的次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行分離、純化及活性初步研究。主要研究工作包括以下幾個(gè)方面： 對(duì)1280株植物內(nèi)生真菌進(jìn)行了模型篩選樣品的制備，共獲得1280份樣品，經(jīng)模型初篩、

2、復(fù)篩，共獲得21份活性高且穩(wěn)定的抗腫瘤細(xì)胞樣品，8份具有較強(qiáng)抗菌活力的樣品，選取其中一株HCCB1621進(jìn)行了進(jìn)一步的研究。 利用傳統(tǒng)分類學(xué)方法、電子顯微鏡觀察、18S rDNA和ITS序列的測(cè)定以及系統(tǒng)發(fā)育分析對(duì)菌株HCCB1621進(jìn)行鑒定分類，根據(jù)各種指標(biāo)鑒定其為木霉屬真菌綠色木霉(Trichoderma viride)。 通過(guò)對(duì)菌株HCCB1621發(fā)酵產(chǎn)物的特性探索，發(fā)現(xiàn)活性物質(zhì)具有熱穩(wěn)定性，在60℃處理1h，活性

3、不喪失；經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng) 120h，產(chǎn)物抗腫瘤活性達(dá)到最強(qiáng)；活性物質(zhì)在pH4-9范圍內(nèi)較穩(wěn)定。 對(duì)菌株HCCB1621的代謝產(chǎn)物進(jìn)行研究，應(yīng)用大孔吸附樹(shù)脂、溶媒萃取、硅膠柱分離、凝膠LH-20、HPLC制備等多種分離純化手段，從其發(fā)酵液共分離出5個(gè)化合物，分別命名為HCCB1621-1，HCCB1621-2，HCCB1621-3，HCCB1621-4，HCCB1621-5，并對(duì)這些代謝產(chǎn)物進(jìn)行質(zhì)譜和核磁共振的<'1>H-NMR和<'1

4、3>C-NMR及二維圖譜的解析，確認(rèn)其分子量分別為256，396，112，376，110Da，并鑒定了HCCB1621-1～4的結(jié)構(gòu)：分別為8，10-三甲基-四氮萘-2，4(3H，10H)二酮；麥角甾-7，9，22-三烯-3-醇；2，4(1H，3H)-嘧啶二酮；7，8-二甲基-10-(1’-D-核糖基)-異咯嗪，俗稱核黃素。其中HCCB1621-1對(duì)A549、LoVo細(xì)胞具有一定的抑制作用，當(dāng)濃度達(dá)到10μg/ml時(shí)，對(duì)直腸癌細(xì)胞LoV