植物抗菌內(nèi)生菌A11的分離鑒定及其活性物質(zhì)的初步研究.pdf

1、植物內(nèi)生菌作為生活在植物組織內(nèi)部的一大類微生物,在其生活史的一定階段或全過程中對宿主植物不表現(xiàn)出病癥,由于生活環(huán)境的特殊性,在生理生物學(xué)作用上與外界環(huán)境微生物都有所不同.在長期共同進化過程中,植物內(nèi)生菌與宿主植物之間形成了一種共生關(guān)系,外界環(huán)境條件與宿主植物代謝變化影響著植物內(nèi)生菌的種類及其代謝發(fā)生相應(yīng)變化.隨著世界人口的增長,某些癌癥,抗藥細(xì)菌,寄生原生動物和病原真菌嚴(yán)重影響著人們身體健康,尋找更有效藥物迫在眉睫.植物抗菌內(nèi)生菌作為植

2、物內(nèi)生菌中的一類,能產(chǎn)生多種新的抗菌活性物質(zhì),不但可以幫助人類解決健康問題,也可以解決植物和動物健康問題,但現(xiàn)階段對植物抗菌內(nèi)生菌的研究剛剛開始,對其特性了解還不夠深入,無法對其充分利用,因此,對植物抗菌內(nèi)生菌的研究不僅能帶來巨大的社會效益還具有現(xiàn)實的理論意義.該實驗主要選擇了一些具有藥用功效的植物組織作為抗菌內(nèi)生菌分離材料,對從蘆薈中分離到的一株具有廣譜抗菌活性的A11菌進行了種屬鑒定,并對其抗菌物質(zhì)進行了分離純化.實驗結(jié)果如下:1、

3、采用組織表面消毒的方法從銀杏、蘆薈等十多種植物組織中分離出了115株植物內(nèi)生菌.2、內(nèi)生菌A11具有廣譜的抗菌活性,對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌等革蘭氏陽性菌有很強的抑制作用,但對革蘭氏陰性菌的抑制活性不高,對一些植物病原真菌如番茄晚疫病原菌,桃紅粉單端孢菌、桃褐腐病原菌等也有較好的抑制效果,對引起食品腐敗的霉菌如青霉、黃曲霉等同樣有很好的抑制效果.3、參照《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》第八版和《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》,通過形態(tài)學(xué)觀察,該菌株在

4、PDA培養(yǎng)基上菌體桿狀,產(chǎn)生芽孢,芽孢膨大為中生或近端生,革蘭氏染色呈陽性,對內(nèi)生菌A11做生理生化特征測定,其接觸酶陽性,氧化酶為陰性,運動性強,有鞭毛,能水解淀粉,利用尿素,不降解羧甲基纖維素,V.P陽性,利用葡萄糖等各種糖類產(chǎn)酸產(chǎn)氣,硫化氫的產(chǎn)生和亞硝酸還原都為陰性,兼性厭氧,該菌在不同培養(yǎng)基上菌體的形態(tài)有很大的變化,從短桿狀到絲狀,生長的最適溫度范圍28-30.5℃;對內(nèi)生菌A11做16S rDNA序列測定,4、內(nèi)生菌A11產(chǎn)生

5、的抗菌活性物質(zhì)具有廣譜抗菌活性,5、發(fā)酵液經(jīng)121℃處理15min,8000r/min離心5min取上清液,上清液用2倍體積的無水乙醇∶丙酮(1∶1,vol/vol)處理去掉多糖及蛋白質(zhì)類物質(zhì),8000r/min離心5min取上清液進行減壓濃縮,回收有機溶劑,濃縮液用1倍體積的正丁醇進行萃取,萃取兩次,合并萃取相,濃縮干燥后,水進行充分溶解,用0.22um的濾膜過濾除去不溶物及細(xì)菌,過sephadex G-25分子篩,使活性物質(zhì)與其它雜