金匱腎氣丸對腎陽虛大鼠精子生成及TGF-β1-CYP19的影響.pdf

1、近年來,男性生殖健康越來越受到威脅,男性不育率已由3:7上升到5:5,男性精子生成障礙越來越受到重視。所謂精子生成,就是指從原細(xì)胞到精子形成的連續(xù)增殖、分化、發(fā)育的過程,經(jīng)歷了精原細(xì)胞增殖、精母細(xì)胞成熟分裂和精子形成等三個(gè)階段[1]。精子生成均會(huì)涉及生精細(xì)胞(spermatogeniccells)、間質(zhì)細(xì)胞(LeydigCells,LCs)及支持細(xì)胞(SertoliCells,SCs)間的相互作用,及黃體生成素(Luteinizingh

2、ormones,LH)、卵泡刺激素(FollicleStimulatingHormone,FSH)等性激素、雄激素(Androgen,ANG)和內(nèi)源性雌激素的精密調(diào)節(jié)及眾多基因的調(diào)控[2-5]。以往研究多集中在LH、FSH、ANG,而對于內(nèi)源性雌激素關(guān)注較少,但內(nèi)源性雌激素在雄性精子生成中具有重要的調(diào)控作用,在雄性體內(nèi)內(nèi)源性雌激素的主要來源是由雄激素在芳香化酶的作用下轉(zhuǎn)化而來,而CYP19是芳香化酶的編碼基因。研究發(fā)現(xiàn)[6-11],CY

3、P19通過調(diào)節(jié)雌激素的合成調(diào)控精子生成,睪丸中的轉(zhuǎn)化生長因子1(Transforminggrowthfactorbeta1,TGF-β1)既可以通過抑制CYP19的表達(dá)而硬性精子生成,也可以直接影響精子生成。
　　“腎主生殖”是中醫(yī)對人體生殖功能的高度概括,就男性而言,主要包括精子的生成依賴于腎陰的滋養(yǎng)和腎陽的溫煦,多少主要取決于腎中陰陽精氣的盛衰。中醫(yī)認(rèn)為,腎虛是引起精子生成障礙,導(dǎo)致男性不育的主要原因。張仲景《金匱要略》中所記

4、載的金匱腎氣丸,是在六味地黃丸的基礎(chǔ)上加桂枝、制附子而成,金匱腎氣丸作為經(jīng)典的補(bǔ)益腎陽方劑,對生殖系統(tǒng)具有明顯作用,其不僅能改善腎陽虛引起的不育大鼠的精子數(shù)量及活率[12],而且可以改善生精功能,但到目前為止,對金匱腎氣丸改善腎陽虛不育的機(jī)制研究多集中通過調(diào)節(jié)在下丘腦—垂體—性腺軸的功能而促進(jìn)生精功能的改善方面錯(cuò)誤!未指定書簽。,但對TGF-β1/CYP19表達(dá)的影響,鮮有報(bào)道,因此,為了進(jìn)一步明確其作用機(jī)制,我們將分三部分探討金匱腎氣

5、丸對腎陽虛模型大鼠精子生成及TGF-β1/CYP19表達(dá)的影響。
　　第一部分:金匱腎氣丸對腎陽虛大鼠精子生成及TGF-β1/CYP19的影響
　　研究目的:觀察金匱腎氣丸干預(yù)腺嘌呤誘導(dǎo)的腎陽虛不育大鼠血清性激素水平、精子密度和精子活率以及TGF-β1/CYP19的表達(dá)的影響。
　　研究方法:將30只成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為3組:正常對照組,模型組、治療組,每組10只。采用腺嘌呤誘導(dǎo)腎陽虛不育模型,并用金匱腎氣丸水煎劑

6、13.5g/kg·d給治療組灌胃30天,觀察各組大鼠一般情況,稱體重;用放射免疫法檢測各組大鼠性激素水平;用精子自動(dòng)檢測儀檢測精子的密度及活率;用免疫組織化學(xué)法檢測各組大鼠睪丸中TGF-β1/CYP19的表達(dá)。
　　研究結(jié)果:模型組大鼠體重與對照組相比明顯減輕(P﹤0.05),與正常對照組相比,模型組T、E2顯著降低(P<0.05);FSH、LH水平無顯著性差異(P>0.05);精子密度顯著降低(P﹤0.05),精子活率顯著減弱(

7、P﹤0.05);免疫組化結(jié)果顯示,TGF-β1和CYP19均表達(dá)于睪丸長形精子細(xì)胞,模型組大鼠睪丸TGF-β1的表達(dá)顯著高于對照組,而金匱腎氣丸治療后,其表達(dá)略有降低,但金匱腎氣丸治療組TGF-β1的表達(dá)仍高于正常對照組,模型組大鼠CYP19的表達(dá)明顯低于正常對照組,而金匱腎氣丸治療組的表達(dá)略高于模型組而低于正常對照組。
　　研究結(jié)論:金匱腎氣丸能夠顯著增加腎陽虛大鼠的體重、血清性激素水平及精子的密度與活率,降低腎陽虛大鼠睪丸中T

8、GF-β1的表達(dá),同時(shí)能增加CYP19基因的表達(dá)。
　　第二部分:阻滯TGFβRⅠ后腎陽虛大鼠精子生成及TGF-β1/CYP19的表達(dá)
　　研究目的:觀察顯微注射后大鼠性激素水平、精子密度及活率、TGF-β1/CYP19的表達(dá)等。
　　研究方法:將40只成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組:正常組、模型組、正常+阻滯組、模型+阻滯組,每組10只。20只成年雄性SD大鼠進(jìn)行顯微注射TGFβRⅠ阻滯劑,阻滯TGF-β1表達(dá);檢測大

9、鼠的性激素水平;用精子自動(dòng)檢測儀檢測精子的密度及活率;用免疫組織化學(xué)法觀察各組大鼠睪丸中TGF-β1/CYP19的表達(dá)。
　　研究結(jié)果:進(jìn)行顯微注射后,模型組、正常+阻滯組、模型+阻滯組與正常組比較,血清T及E2水平升高,精子密度及活率升高,均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,TGF-β1陽性表達(dá)位于長形精子細(xì)胞,CYP19陽性表達(dá)位于長形精子細(xì)胞和圓形精子細(xì)胞,阻滯組大鼠睪丸TGF-β1的表達(dá)明顯降低,而CY

10、P19的表達(dá)明顯升高。
　　研究結(jié)論:顯微注射TGFβRⅠ阻滯劑后,大鼠睪丸精子數(shù)量有所升高,精子活率較模型組有所改善。
　　第三部分:金匱腎氣丸對抑制TGFβRⅠ的腎陽虛大鼠精子生成和TGF-β1/CYP19的影響
　　研究目的:觀察金匱腎氣丸干預(yù)顯微注射術(shù)后大鼠血清性激素和精子密度、精子活率的變化情況以及TGF-β1/CYP19的表達(dá)。
　　研究方法:60只成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組、正常+治療組、模型組

11、、模型+治療組、阻滯組、阻滯+治療組、每組10只。阻滯+治療組10只成年雄性SD大鼠顯微注射TGFβRⅠ后,繼續(xù)灌服金匱腎氣丸水煎劑治療,30天后處死大鼠,留取血清、精液標(biāo)本及睪丸組織,檢測各組大鼠的血清性激素水平;用精子自動(dòng)檢測儀檢測精子的密度及活率;用免疫組織化學(xué)法檢測大鼠睪丸中TGF-β1/CYP19表達(dá)。
　　研究結(jié)果:模型組與模型+治療組,阻滯組與阻滯+治療組比較,血清性激素水平、精子密度和精子活率均無顯著性差異(P>0