脂聯(lián)素對體外培養(yǎng)軟骨細胞NOS、NO、MMP-3的影響.pdf

1、目的:本實驗通過體外原代培養(yǎng)的方法建立SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨的有限細胞系，在此基礎(chǔ)上采用脂聯(lián)素誘導(dǎo)軟骨細胞，觀察NOS活性及NO、MMP-3濃度以及NO對MMP-3的影響，探討脂聯(lián)素在關(guān)節(jié)軟骨病變發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　 方法:
　　 1.選用SD大鼠的膝關(guān)節(jié)軟骨作為細胞培養(yǎng)的組織來源，建立關(guān)節(jié)軟骨細胞有限細胞系，選用第二代關(guān)節(jié)軟骨為被干預(yù)細胞。
　　 2.實驗1的實驗組為0.25μg/ml脂聯(lián)素組、0.5μg/ml

2、脂聯(lián)素組和0.75μg/ml脂聯(lián)素組;對照組為同劑量DMEM培養(yǎng)基，其他條件同實驗組。各組干預(yù)軟骨細胞后，分別在24、48、72小時用硝酸還原酶法測定NO濃度、ELISA法測定NOS及MMP-3濃度。
　　 3.實驗2的對照組為0.75μg/ml脂聯(lián)素組;實驗A組為0.75μg/ml脂聯(lián)素聯(lián)合氨基胍;實驗B組為0.75μg/ml脂聯(lián)素聯(lián)合地塞米松。各組干預(yù)細胞后分別在24、48、72小時用硝酸還原酶法測定NO濃度、ELISA法測

3、定NOS及MMP-3濃度。
　　 結(jié)果:
　　 1.在實驗1中，0.25μg/ml脂聯(lián)素組的軟骨細胞24h、48h、72h分泌的NO濃度與較對照組均顯著升高(5.96±1.34 vs2.00±0.69P＜0.05;8.94±3.20 vs2.67±0.37 P＜0.05;10.98±1.15 vs2.78±0.95 P＜0.05),NOS表達水平也均顯著升高(6.90±0.64 vs2.43±0.15 P＜0.05;8.

4、61±0.52 vs2.61±0.33 P＜0.05;11.17±0.76 vs3.19±0.31 P＜0.05);0.5μg/ml脂聯(lián)素組和0.75μg/ml脂聯(lián)素組作用24h、48h、72h后，細胞NO及NOS水平較對照組也都顯著升高(P＜0.05)，且實驗組之間總體NO濃度及NOS水平兩兩比較有顯著性差異(NO P＜0.05; NOS P＜0.05);實驗組(0.25μg/ml組、0.5μg/ml組、0.75μg/ml組)軟骨細胞

5、MMP-3的濃度較對照組均下降(96.91±1.3 vs111.5±12.1 P＜0.05;100.6±8.7 vs111.5±12.1 P＜0.05;97.0±3.2 vs111.5±12.1 P＜0.05)，實驗組之間兩兩比較無顯著差異。
　　 2.在實驗2中，兩實驗組軟骨細胞NO濃度較對照組均下降（A組4.39±1.08vs26.68±12.51 P＜0.05;B組3.91±2.23 vs26.68±12.51 P＜0.0

6、5），實驗組之間NO水平無明顯差異;實驗組NOS表達水平較對照組也均下降(A組7.67±3.09 vs33.33±12.23 P＜0.05;B組4.88±1.59 vs33.33±12.23P＜0.05)，實驗組之間NOS水平無明顯差異。實驗組MMP-3水平較對照組顯著升高(A組117.2±21.4 vs98.3±3.7 P＜0.05;B組112.2±13.6 vs98.3±3.7 P＜0.05)，實驗組之間無也明顯差異;NO濃度與MM