漢坦病毒感染者與非感染者HLA-B、DQ基因SNP位點多態(tài)性的差異性探討.pdf

1、目的：通過對腎綜合征出血熱(HFRS)感染者和健康人群HLA-B及-DQ基因區(qū)域單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點的檢測，分析各位點基因型頻率及等位基因頻率，探討人感染漢坦病毒與其遺傳特性間的關(guān)聯(lián)性。
　　 方法：
　　 1、通過流行病學(xué)調(diào)查，收集河北省腎綜合征出血熱病例或疑似病例血標(biāo)本，并收集健康人全血標(biāo)本做為對照；
　　 2、用腎綜合征出血熱病毒抗體診斷試劑盒（膠體金法）篩選漢坦病毒IgM、IgG抗體陽性全血標(biāo)本；

2、
　　 3、分別從陽性和健康人全血標(biāo)本中提取基因組DNA;
　　 4、根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)在GENEBANK中查找已知的HLA-B及-DQ區(qū)域上的SNP位點，設(shè)計等位基因特異性引物，采用等位基因特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)(ASP-PCR)技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，電泳觀察結(jié)果；
　　 5、對各SNP位點進(jìn)行基因分型，分析其基因多態(tài)性的特征。利用病例對照研究(Case-control Study)探討人群單核苷酸多態(tài)性與人群漢坦病毒感染狀

3、態(tài)之間的關(guān)聯(lián)性。
　　 結(jié)果：
　　 1、2009年河北省共報告腎綜合征出血熱病例221例，與前幾年相比發(fā)病數(shù)有大幅下降，發(fā)病率為0.316/10萬。全省11個地市均有發(fā)病，其中秦皇島和石家莊占全省總發(fā)病數(shù)49.77％;其次為滄州、唐山、保定、邢臺和張家口；而承德、衡水、邯鄲、廊坊發(fā)病數(shù)較低。
　　 2、2010年河北省疾病預(yù)防控制中心出血熱室共收集腎綜合征出血熱病例或疑似病例血標(biāo)本85份，經(jīng)腎綜合征出血熱病毒抗

4、體診斷試劑盒（膠體金法）檢測陽性36份（其中有全血的陽性標(biāo)本24份），陽性率為42.35％。
　　 3、根據(jù)Hardy-Weinberg平衡檢驗公式，用各SNP位點實驗所得各基因型的實際人數(shù)推算出其理論人數(shù)，統(tǒng)計結(jié)果顯示：(1)rs41557013位點x2=2.357,P=0.308＞0.05;(2)rs34933313位點x2=3.297，P=0.192＞0.05;(3)rs71543422位點x2=1.752,P=0.416

5、＞0.05;(4)rs12722040位點x2=1.067,P=0.587＞0.05；(5)rs1142324位點x2=0.036,P=0.982＞0.05。說明各SNP位點實際基因型頻率與理論基因型頻率經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析無顯著性差異，其分布均符合Hardy-Weinberg平衡，所選標(biāo)本有較好的群體代表性。
　　 4、各SNP位點基因型頻率與等位基因頻率的比較，結(jié)果顯示：rs34933313位點患者組和健康對照組的CC基因型頻率分別

6、為4.17％和29.41％，GG基因型頻率分別為12.50％和15.69％，CG基因型頻率分別為83.33％和54.90％，CC、GG基因型頻率患者組低于健康對照組，而CG基因型頻率患者組明顯高于健康對照組，差異具有顯著性。提示rs34933313位點可能與HV感染相關(guān)，CG基因型的存在可能會增加人群感染HV的機率。該位點患者組和健康對照組的C等位基因頻率分別為45.83％和56.86％，G等位基因頻率分別為54.17％和43.14％，

7、經(jīng)統(tǒng)計分析無顯著性差異?？梢妑s34933313位點C和G等位基因頻率在患者組和健康對照組間無顯著性差別。其它四個SNP位點(rs41557013、rs71543422、rs12722040、rs1142324)的基因型頻率和等位基因頻率在患者組和健康對照組間經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析均無顯著性差異。
　　 結(jié)論：
　　 1、rs34933313位點的基因多態(tài)性可能與人群HV感染有關(guān)，此位點為CG基因型可能會增加人群感染HV的風(fēng)險。<