冬蟲夏草菌菌絲體提取物對LPS誘導的炎癥反應的抑制作用.pdf

1、本研究通過建立脂多糖（LPS）刺激小鼠腹腔巨噬細胞RAW264.7的炎癥模型，從體外研究冬蟲夏草菌絲體——中國被毛孢粗提取物的抗炎作用，并對其抗炎機理做初步探索，為進一步體內(nèi)研究，臨床研究和醫(yī)藥應用提供理論和實踐依據(jù)。同時也為冬蟲夏草菌絲體的市場開拓提供參考。
　　本文采用MTT法測定冬蟲夏草菌絲體水提物和乙醇提取物以及乙醇提取物的分級提取物——石油醚提取物，氯仿提取物，乙酸乙酯提取物以及提取物殘渣在一定濃度范圍內(nèi)對細胞的毒性作用

2、，并以此樣品濃度為依據(jù)，用Griess法測定樣品對脂多糖刺激下小鼠腹腔巨噬細胞RAW264.7產(chǎn)生的一氧化氮（NO）的影響，采用免疫印跡法（Western Blot）檢測冬蟲夏草水提物對脂多糖刺激下細胞產(chǎn)生的一氧化氮合酶（iNOS），環(huán)氧化酶（COX-2）作用的時效關(guān)系和量效關(guān)系。并用免疫印跡法研究冬蟲夏草水提物對脂多糖刺激下細胞產(chǎn)生的p38蛋白（MAPK信號通路）和p56蛋白（NF-κB信號通路）的作用的時效關(guān)系和量效關(guān)系。
　

3、　研究結(jié)果表明：冬蟲夏草水提物與乙醇提取物的各個濃度（500,250,100,10μg/mL）對巨噬細胞無細胞毒作用，并對于脂多糖刺激下小鼠腹腔巨噬細胞產(chǎn)生的一氧化氮有下調(diào)作用，并具有量效關(guān)系。乙醇提取物的分級提取物中濃度為100μg/mL時，四種提取物及提取物殘留對 LPS刺激下的RAW264.7產(chǎn)生的NO有下調(diào)作用。其中以氯仿提取物的下調(diào)作用為最強。濃度為10μg/mL時，只有氯仿提取物對NO有下調(diào)作用。以冬蟲夏草水提物為樣品研究i

4、NOs蛋白發(fā)現(xiàn)濃度為100μg/mL,作用時間為6h時，樣品對iNOs的下調(diào)作用最強（相對于12h，24h）；在一定濃度范圍內(nèi)（25,50,100μg/mL）,樣品均可下調(diào)iNOs的產(chǎn)生并呈現(xiàn)量效關(guān)系。以冬蟲夏草水提物為樣品研究COX-2蛋白發(fā)現(xiàn)濃度為100μg/mL,作用時間為12h時（相對于6h，24h），為樣品對COX-2的下調(diào)作用最強；在一定濃度范圍內(nèi)（50,100μg/mL）,樣品均可下調(diào)COX-2的產(chǎn)生并呈現(xiàn)量效關(guān)系。以冬蟲