冬蟲夏草菌菌絲體提取物對(duì)LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的抑制作用.pdf

1、本研究通過建立脂多糖（LPS）刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞RAW264.7的炎癥模型，從體外研究冬蟲夏草菌絲體——中國(guó)被毛孢粗提取物的抗炎作用，并對(duì)其抗炎機(jī)理做初步探索，為進(jìn)一步體內(nèi)研究，臨床研究和醫(yī)藥應(yīng)用提供理論和實(shí)踐依據(jù)。同時(shí)也為冬蟲夏草菌絲體的市場(chǎng)開拓提供參考。
　　本文采用MTT法測(cè)定冬蟲夏草菌絲體水提物和乙醇提取物以及乙醇提取物的分級(jí)提取物——石油醚提取物，氯仿提取物，乙酸乙酯提取物以及提取物殘?jiān)谝欢舛确秶鷥?nèi)對(duì)細(xì)胞的毒性作用

2、，并以此樣品濃度為依據(jù)，用Griess法測(cè)定樣品對(duì)脂多糖刺激下小鼠腹腔巨噬細(xì)胞RAW264.7產(chǎn)生的一氧化氮（NO）的影響，采用免疫印跡法（Western Blot）檢測(cè)冬蟲夏草水提物對(duì)脂多糖刺激下細(xì)胞產(chǎn)生的一氧化氮合酶（iNOS），環(huán)氧化酶（COX-2）作用的時(shí)效關(guān)系和量效關(guān)系。并用免疫印跡法研究冬蟲夏草水提物對(duì)脂多糖刺激下細(xì)胞產(chǎn)生的p38蛋白（MAPK信號(hào)通路）和p56蛋白（NF-κB信號(hào)通路）的作用的時(shí)效關(guān)系和量效關(guān)系。
　

3、　研究結(jié)果表明：冬蟲夏草水提物與乙醇提取物的各個(gè)濃度（500,250,100,10μg/mL）對(duì)巨噬細(xì)胞無細(xì)胞毒作用，并對(duì)于脂多糖刺激下小鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的一氧化氮有下調(diào)作用，并具有量效關(guān)系。乙醇提取物的分級(jí)提取物中濃度為100μg/mL時(shí)，四種提取物及提取物殘留對(duì) LPS刺激下的RAW264.7產(chǎn)生的NO有下調(diào)作用。其中以氯仿提取物的下調(diào)作用為最強(qiáng)。濃度為10μg/mL時(shí)，只有氯仿提取物對(duì)NO有下調(diào)作用。以冬蟲夏草水提物為樣品研究i

4、NOs蛋白發(fā)現(xiàn)濃度為100μg/mL,作用時(shí)間為6h時(shí)，樣品對(duì)iNOs的下調(diào)作用最強(qiáng)（相對(duì)于12h，24h）；在一定濃度范圍內(nèi)（25,50,100μg/mL）,樣品均可下調(diào)iNOs的產(chǎn)生并呈現(xiàn)量效關(guān)系。以冬蟲夏草水提物為樣品研究COX-2蛋白發(fā)現(xiàn)濃度為100μg/mL,作用時(shí)間為12h時(shí)（相對(duì)于6h，24h），為樣品對(duì)COX-2的下調(diào)作用最強(qiáng)；在一定濃度范圍內(nèi)（50,100μg/mL）,樣品均可下調(diào)COX-2的產(chǎn)生并呈現(xiàn)量效關(guān)系。以冬蟲