PGE-,1-對(duì)LPS誘導(dǎo)枯否細(xì)胞分泌炎癥細(xì)胞因子的抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討前列腺素E1(PGE1)對(duì)內(nèi)毒素脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的大鼠枯否細(xì)胞(Kupffer Cell,KC)分泌炎癥細(xì)胞因子的影響。觀察大鼠枯否細(xì)胞在LPS刺激及PGE1作用下炎癥細(xì)胞因子水平及核因子-kB(NF-kB)的變化，進(jìn)一步探討PGE1的抗炎作用及其機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供新的啟示。 方法：采用膠原酶原位循環(huán)灌注和Nycodez密度梯度離心法分離得到高純度的大鼠枯否細(xì)胞，在過夜培養(yǎng)后沖洗兩遍，以4-6x105/ml的細(xì)胞

2、濃度，接種于24孔培養(yǎng)板。 分離并培養(yǎng)枯否細(xì)胞48小時(shí)后，分別設(shè)立不同濃度PGE1組，確立其對(duì)細(xì)胞無毒性的劑量范圍。 向枯否細(xì)胞中加入LPS及PGE1(分三種不同濃度)，分為對(duì)照組、刺激組(LPS10ng/ml)和PGE1組(LPS+PGE1)，刺激原代培養(yǎng)的枯否細(xì)胞3小時(shí)。觀察不同濃度PGE1對(duì)大鼠枯否細(xì)胞TNF-α(腫瘤壞死因子-α)及IL-6(白細(xì)胞介素-6)釋放的影響。并觀察LPS及PGE1的刺激作用對(duì)枯否細(xì)胞中

3、NF-kB活性的影響。 應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)TNF-α、放免法(RIA)測(cè)定IL-6水平。采用凝膠電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA)檢測(cè)NF-KB活性和EMSA特異性。 結(jié)果：離體正常大鼠的枯否細(xì)胞經(jīng)過LPS刺激后，NF-kB活性顯著增強(qiáng)，上清液中TNF-α及IL-6分泌水平均明顯高于對(duì)照組(P<0.01)；不同濃度組PGE1均能顯著降低TNF-α、IL-6的釋放水平及NF-kB的活性(P<0.05)，且量效關(guān)