冬蟲(chóng)夏草菌—中國(guó)被毛孢(Hirsutella sinensis)菌絲體水提物抗氧化活性研究.pdf

1、冬蟲(chóng)夏草[Cordyceps]，是我國(guó)珍貴的中藥。實(shí)驗(yàn)表明它具有多種藥理活性，能補(bǔ)肺益腎，調(diào)節(jié)免疫功能，抗疲勞，抗癌等，并具有抗氧化和保護(hù)氧化損傷的作用。目前，冬蟲(chóng)夏草的無(wú)性型菌絲體-中國(guó)被毛孢(Hirsutella sinensis)已可用人工發(fā)酵方法培養(yǎng)，但對(duì)人工培養(yǎng)獲得的中國(guó)被毛孢菌絲體是否與天然冬蟲(chóng)夏草具有相似的化學(xué)組成和藥用價(jià)值缺乏足夠的研究。
　　 本研究分別用化學(xué)測(cè)定法和PC12細(xì)胞氧化損傷模型法對(duì)中國(guó)被毛孢菌絲體

2、水提物(HSE)進(jìn)行了抗氧化研究。
　　 (一)FRAP法測(cè)定了人工培養(yǎng)中國(guó)被毛孢菌絲體熱水提取物的還原力。結(jié)果表明：1mg/mL人工培養(yǎng)中國(guó)被毛孢菌絲體水提物相當(dāng)于211.5±8.5μmol/mL Fe2+；方法學(xué)研究顯示線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)R2為0.9992；重現(xiàn)性為3.8％；精密度平均偏差(RSD)為3.1%；回收率為105.4±5.8%；該方法在30min內(nèi)結(jié)果的變異系數(shù)為3.0%。
　　 (二)DPPH·自由基清除率研

3、究顯示：在HSE為0.5mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL、3.0mg/mL、4.0mg/mL、5.0mg/mL、6.0mg/mL時(shí)，清除率分別為：6.6%±0.8%、16.1%±2.8%、31.6%±0.5%、45.9%±0.5%、60.0%±1.3%、72.0±1.4%、74.8%±1.0%。用去脫氧核糖法對(duì)HSE的·OH自由基清除率進(jìn)行測(cè)定：在HSE為2.0mg/mL、4.0mg/mL、6.0mg/mL、8.0mg/m

4、L、10.0mg/mL時(shí)，清除率分別為：27.5%±4.4%、43.6%±1.9%、50.8%±6.4%、60.9%±2.8%、64.2%±1.5%。在HSE為2.0mg/mL、4.0mg/mL、6.0mg/mL、8.0mg/mL、10.0mg/mL時(shí)，其螯合Fe2+分別為22.0%±5.1%、44.8%±7.3%、53.6%±0.6%、62.2%±0.4%、66.4%±0.2%。
　　 (三)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞(PC12)氧化

5、損傷模型研究結(jié)果顯示：用H2O2(200μM)處理細(xì)胞建立模型，用MTT方法檢測(cè)細(xì)胞存活率，損傷處理2h后，模型組細(xì)胞存活率為36.5%±3.8%，若提前給予HSE孵育再進(jìn)行H2O2處理，則可提高細(xì)胞的存活率。當(dāng)HSE濃度為5μg/mL、25μg/mL、100μg/mL時(shí)，細(xì)胞存活率分別為41.1%±4.1%(P>0.05)、45.2%±1.7%(P<0.05)和54.8%±3.3%(P<0.01)，顯示出HSE對(duì)H2O2造成的氧化損傷

6、具有保護(hù)作用。
　　 LDH活性測(cè)定結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了HSE的氧化損傷保護(hù)作用。模型組LDH酶活性為2886±399u/mL；而HSE在5μg/mL、25μg/mL、100μg/mL時(shí)，LDH酶活性分別為3000±450u/mL(P>0.05)、2667±540u/mL(P>0.05)、2295±329u/mL(P<0.01)。
　　 HSE還可以劑量依賴(lài)的提高細(xì)胞胞漿SOD活性。H2O2模型組SOD活性39±12.1%；

7、HSE在5μg/mL、25μg/mL、100μg/mL時(shí)，胞漿SOD活性分別為：36%±9.9%(P>0.05)、47%±17.2%(P>0.05)、63%±14.9%(P<0.05)，其中中和高濃度組的SOD活性均高于模型組。
　　 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧ROS水平顯示：對(duì)照組細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度為70.24；模型組該值升至316.21，而用25μg/mL和100μg/mL的HSE同時(shí)處理則劑量依賴(lài)性地減少ROS熒光強(qiáng)度，并分