豬腸黏膜保護(hù)因子的短小芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)建立.pdf_第1頁(yè)
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1、仔豬腹瀉的發(fā)生主要由腸黏膜屏障功能受損引起?？狗置谝蜃樱ˋntisecretory factor,AF）、血紅素加氧酶-1（Heme oxygenase,HO-1）、腸三葉肽因子（Trefoil factor family3,TFF3）能修復(fù)上皮細(xì)胞損傷，在腸黏膜屏障功能維持中發(fā)揮重要作用。短小芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)能高效分泌表達(dá)外源蛋白，且不產(chǎn)生內(nèi)毒素，能調(diào)節(jié)腸道的微生態(tài)平衡。自然分離腸黏膜保護(hù)因子的成本高、產(chǎn)量和活性較低，很難直接用于工業(yè)

2、化生產(chǎn)或作為飼料添加劑使用。本文旨在建立豬腸黏膜保護(hù)因子（AF、HO-1、TFF3）的短小芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)，為降低仔豬腹瀉發(fā)生、保護(hù)腸黏膜屏障提供新思路和新方法。
　　利用PCR方法從豬組織中克隆AF、HO-1、TFF3基因，以pNCMO2為載體分別構(gòu)建重組表達(dá)載體pNCMO2-TFF3、pNCMO2-HO-1、pNCMO2-AF，利用電轉(zhuǎn)的方法將重組表達(dá)載體pNCMO2-TFF3、pNCMO2-HO-1、pNCMO2-AF轉(zhuǎn)入短

3、小芽孢桿菌，SDS-PAGE和Western Blot方法分析AF、HO-1、TFF3基因在短小芽孢桿菌中的融合表達(dá)。結(jié)果表明，克隆了豬AF、HO-1、TFF3基因，全長(zhǎng)分別為1164bp、897bp、273bp，分別編碼387個(gè)、298個(gè)和87個(gè)氨基酸；電泳和測(cè)序表明與預(yù)期目的基因片段大小一致；成功構(gòu)建了豬重組表達(dá)載體pNCMO2-TFF3、pNCMO2-HO-1、pNCMO2-AF，菌液PCR和雙酶切結(jié)果鑒定正確；電轉(zhuǎn)后的酶切鑒定結(jié)

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