沃特曼內(nèi)酯類化合物的生物轉(zhuǎn)化及其活性評(píng)價(jià).pdf

1、寄生性蠕蟲和宿主之間的呼吸鏈存在較大差異，寄生性蠕蟲為適應(yīng)宿主體內(nèi)的低氧環(huán)境，采用厭氧呼吸鏈(NFRD-fumarate還原酶，簡(jiǎn)稱NFRD)進(jìn)行電子傳遞。而哺乳動(dòng)物不具有該酶系，因此厭氧呼吸鏈可以作為抗寄生性蠕蟲藥物研發(fā)的新靶標(biāo)。同時(shí)厭氧呼吸鏈抑制劑可以通過(guò)抑制其活性選擇性殺死腫瘤細(xì)胞DLD-1（人結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞株）和Panc-1（人胰腺癌細(xì)胞株），因此厭氧呼吸鏈抑制劑也是潛在的抗腫瘤的藥物。
　　沃特曼內(nèi)酯類化合物是從鄔氏

2、黃絲曲霉中分離得到的一類化合物，同已報(bào)道的厭氧呼吸鏈抑制劑Ukulactones具有一定的結(jié)構(gòu)類似性。本研究首先以沃特曼內(nèi)酯F為底物，使用12株海洋真菌對(duì)其進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化。12株真菌均能將沃特曼內(nèi)酯F轉(zhuǎn)化為其結(jié)構(gòu)類似物;但效率不同，其中DL1103的轉(zhuǎn)化率最高，為10.7％;對(duì)其進(jìn)行了分子水平的菌種鑒定，PCR產(chǎn)物為562 bp，經(jīng)BLAST序列對(duì)比表明其同Aspergillus sp.nov.F1的同源性達(dá)到100％;對(duì)其進(jìn)行了生物轉(zhuǎn)化

3、的放大實(shí)驗(yàn)，并對(duì)其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物進(jìn)行了分離純化。
　　其次，建立了抗蠕蟲活性評(píng)價(jià)體系。主要建成的模型包括厭氧呼吸鏈體系的NFRD酶系及其組成酶ComplexⅠ、好氧呼吸鏈體系的NADH氧化酶及其組成酶ComplexⅠ和ComplexⅡ，共5個(gè)篩選模型。確定了各種模型的最佳反應(yīng)條件，其中厭氧呼吸鏈體系中NFRD酶系為37℃，pH7.2，350μM NADH，酶濃度為120μg/ml（厭氧環(huán)境）;其ComplexⅠ為pH7.2，0.32 m

4、M RQ，0.35 mM NADH，酶濃度為160μg/ml;好氧呼吸鏈的NADH氧化酶的最佳反應(yīng)條件為37℃，pH6.8，350μM NADH，酶濃度為20μg/ml;其ComplexⅠ為pH6.8,0.74 mM DCIP,0.35 mM NADH,0.135 mM UQ和1 mM AntimycinA，酶濃度為45μg/ml;其ComplexⅡ?yàn)閜H6.8，0.74 mM DCIP，0.35 mM Sodium succinate

5、，0.135 mM UQ和1 mM Antimycin A，酶濃度為45μg/ml。NFRD模型通過(guò)制造厭氧條件等條件的優(yōu)化，解決了原方法可能活性評(píng)價(jià)不準(zhǔn)確的問(wèn)題。
　　在上述工作的基礎(chǔ)上測(cè)定了沃特曼內(nèi)酯E、F和轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的活性，結(jié)果顯示沃特曼內(nèi)酯E和F對(duì)NFRD的IC50分別約為0.57和0.63μM，對(duì)NFRD中ComplexⅠ的IC50分別約為0.56和0.51μM，對(duì)NADH氧化酶的IC50＞100μM，對(duì)NADH氧化酶Co