轉檉柳LEA基因煙草耐鹽性分析.pdf

1、本研究是對轉檉柳LEA基因煙草當代和子一代的耐鹽堿性進行研究，從而驗證LEA基因的功能，為通過基因工程手段培育抗逆植物提供基礎資料，研究結果如下： 在獲得的41株卡那抗性植株中選取10株生長良好的轉基因煙草進行分析，PCR檢測檢測全部為陽性，初步證明LEA基因已經整合到煙草基因組中。對其中8個轉基因株系進行實時熒光定量PCR檢測，證實了轉入的外源基因均能夠表達，但各轉基因株系外源基因的表達水平不盡相同，相對于內標基因GAPDH(

2、甘油醛-3-磷酸-脫氫酶)的表達水平為36.64～169.32之間。 對轉基因煙草當代(T0)10個株系分別進行了耐鹽性研究，結果表明：轉基因煙草當代(T0)組培苗在230mmol/LNaCl濃度下能夠正常生長，在該濃度條件下，培養(yǎng)20d后分別對轉基因煙草及非轉基因對照煙草的增重、生根及鹽害指數(shù)等進行調查。結果顯示：10個轉基因株系的生根率在40％～60％之間，而對照為30％；轉基因煙草各株系的增重高于對照的45.58％～79.

3、08％；各轉基因株系鹽害指數(shù)平均值低于對照的37.6％，其中T0-17低于對照的60％。分別對轉基因煙草當代(T0)盆栽苗進行240mmol/L和340mmol/L的NaCl脅迫，結果也表明：各轉基因株系的耐鹽性均高于非轉基因對照煙草。 對轉基因煙草當代(T0)7個株系分別進行了NaHCO3抗性研究，對轉基因煙草的生根率、堿害指數(shù)、SOD活性、POD活性和相對電導率的變化進行調查，結果表明：當NaHCO3濃度為30mmol/L時

4、，轉基因煙草堿害指數(shù)達到50％左右，且保持有10～30％左右生根率，而對照煙草受害程度較大，已經不能生根。且在此濃度下，SOD活性、POD活性均達到最大值，相對電導率的測定結果也表明各轉基因株系的NaHCO3抗性均高于非轉基因對照煙草。 將T0代得到的轉基因煙草種子(T1代)播種于含100mg·L-1卡那霉素的1/2MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)5d后，對6個轉基因株系的綠白苗之比進行統(tǒng)計，結果表明，轉基因煙草T1-33、T1-6和T1-22

5、的綠色苗與白化苗比例基本符合(22-1)∶1，T1-42株系的綠白苗比例是15.1，分離規(guī)律符合(24-1)∶1。 選取T1代的6個卡那霉素抗性株系進行PCR檢測，檢測結果全部為陽性，實時熒光定量PCR檢測結果顯示：6個轉基因株系LEA基因相對于內標基因GAPDH的表達水平為132.17～242.88，證實了外源基因能夠轉錄。 對轉LEA基因煙草T1代的6個株系分別進行不同濃度NaCl脅迫處理，分析了NaCl脅迫下轉基因

6、煙草的生長量、根系的發(fā)育及鹽害程度。結果顯示，各轉基因煙草T1代組培苗在150mmol·L-1的NaCl培養(yǎng)基上根系生長良好，平均增重是非轉基因對照的7.72倍，平均高生長是非轉基因對照的3.51倍，鹽害指數(shù)低于或等于50％，而非轉基因對照煙草T1代組培苗生長緩慢、根系幾乎不能生長發(fā)育，鹽害指數(shù)達65％，表明LEA基因的導入同樣提高了T1代煙草的耐鹽性。證明了外源LEA基因能夠在轉基因煙草中穩(wěn)定遺傳，檉柳LEA基因的表達可提高煙草耐鹽堿