旱稻耐鹽基因的轉(zhuǎn)化及耐鹽性試驗(yàn).pdf

1、本研究采用基因工程的手段將甜菜堿醛脫氫酶基因轉(zhuǎn)入到已經(jīng)具有1-磷酸甘露醇脫氫酶基因并穩(wěn)定遺傳的旱稻297、旱稻277、旱稻502材料中，以期增加旱稻的耐鹽性，解決鹽堿地的開發(fā)利用問題，同時(shí)推動旱稻的大面積推廣。　　以胚性愈傷組織為受體材料，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將BADH基因?qū)牒档静牧?。對外源基因在旱稻植株中的整合和表達(dá)情況進(jìn)行了研究，同時(shí)在轉(zhuǎn)化過程中，對影響轉(zhuǎn)化的各個因素做了進(jìn)一步的探討?！　〗?jīng)過PCR檢測和Southern雜交證明，

2、BADH基因也整合到旱稻基因組中，再經(jīng)PCR檢測，BADH基因和mtlD基因同時(shí)導(dǎo)入旱稻材料中。獲得同時(shí)轉(zhuǎn)入BADH基因和mtlD基因的植株共有44株，其中旱稻502植株中有28株，旱稻277植株中有9株，旱稻297中有7株。對轉(zhuǎn)基因植株后代T1進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄PCR證明，BADH基因在旱稻材料中得到表達(dá)?！　∞D(zhuǎn)雙基因植株T0代生長情況總體看來，株高明顯下降，穗長明顯變短，成穗率也下降，轉(zhuǎn)化植株生育期延長，64.2％的轉(zhuǎn)化植株可育，但育性普

3、遍下降，并且各株之間結(jié)實(shí)率差異較大?！　⒁呀?jīng)轉(zhuǎn)入mtlD基因的并穩(wěn)定遺傳的T5代單基因材料和已經(jīng)轉(zhuǎn)入BADH基因T2代的單基因材料在山東東營0.5％-0.6％NaCl的鹽堿地上種植選擇，大部分轉(zhuǎn)基因植株正常生長，非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩仓?旱稻502最嚴(yán)重)幾乎不能生長?！　∞D(zhuǎn)基因植株耐鹽性試驗(yàn)表明，轉(zhuǎn)雙基因植株的耐鹽性得到明顯的提高，能達(dá)到0.75％(質(zhì)量/體積)NaCl的耐鹽能力；而在此鹽濃度下，非轉(zhuǎn)基因植株是不能生長的?！　∞D(zhuǎn)單基因