“一測多評(píng)”法用于梔子金花丸多成分含量測定的可行性研究.pdf

1、中成藥的質(zhì)量長期以來多以單一指標(biāo)進(jìn)行控制，但中藥的多成分、多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)決定了對(duì)其進(jìn)行多指標(biāo)質(zhì)量控制的必要性，因此多成分同步測定的質(zhì)量控制模式應(yīng)運(yùn)而生。但商品化對(duì)照品的供需矛盾和多指標(biāo)質(zhì)量控制所致的高昂的檢測成本限制了該質(zhì)量評(píng)價(jià)模式在中藥實(shí)際的生產(chǎn)、科研和監(jiān)管領(lǐng)域的推廣和應(yīng)用?！耙粶y多評(píng)”（簡稱為QAMS）的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)模式為解決該矛盾提供了新思路。
　　梔子金花丸的功效是清熱瀉火，涼血解毒，可用于口舌生瘡，牙齦腫痛等肺胃實(shí)熱癥

2、，是常用的中藥復(fù)方制劑。現(xiàn)行2010年版《中國藥典》一部含量測定項(xiàng)下僅以梔子苷一個(gè)指標(biāo)成分對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)?，F(xiàn)將一測多評(píng)的質(zhì)量評(píng)價(jià)模式應(yīng)用于梔子金花丸，探索該方法應(yīng)用于中藥復(fù)方的可行性，使多成分質(zhì)量控制方法用于中成藥質(zhì)量控制，提高其質(zhì)量控制水平，進(jìn)一步保證藥物的安全、有效、可控，并盡量降低檢測成本。
　　一、梔子金花丸中三類成分的含量測定采用HPLC法，建立對(duì)梔子金花丸中3種不同類型的10個(gè)成分（小檗堿、黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、

3、蘆薈大黃素、漢黃芩素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚，分別用字母A～J代表該10個(gè)成分）的含量進(jìn)行同步測定的方法。采用Syncronis C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.2％磷酸水，梯度洗脫，流速1mL·min-1，柱溫30℃，分別在同一波長(254nm)和不同波長（228nm、274nm、254nm）處同時(shí)檢測。經(jīng)過系統(tǒng)的方法學(xué)考察，其精密度、線性、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收試驗(yàn)均符合中藥成分

4、含量測定的要求。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明兩種檢測波長模式下該方法分離度好、無雜質(zhì)干擾、簡便、準(zhǔn)確，可用于梔子金花丸中上述10種成分的含量測定。
　　二、梔子金花丸中三類成分QAMS質(zhì)量評(píng)價(jià)模式的建立
　　1、采用PDA型檢測器，以大黃素為內(nèi)參物，通過斜率法，分別于兩種不同檢測波長模式下，即同一波長（254 nm）和不同波長（228 nm、274 nm、254 nm）處檢測，測定了其他9個(gè)待測成分小檗堿、黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、蘆薈大黃

5、素、漢黃芩素、大黃酸、大黃酚和大黃素甲醚與內(nèi)參物大黃素間的相對(duì)校正因子(Relative Correction Factor，RCF)。在254nm波長處檢測時(shí)，最終確定的RCF分別為:f254nm小檗堿/大黃素=1.01、f254nm黃芩苷/大黃素=0.427、f254nm漢黃芩苷/大黃素=0.541、f254nm黃芩苷/大黃素=0.887、f254nm蘆薈大黃素/大黃素=1.39、f254nm漢黃芩素/大黃素=0.793、f254n

6、m大黃酸/大黃素=1.22、f254nm大黃酚/大黃素=1.48、f254nm大黃素甲醚/大黃素=1.01。在不同波長處檢測時(shí)，最終確定的RCF分別為:f228nm/254nm小檗堿/大黃素=1.31、f274nm/254nm黃芩苷/大黃素=0.989、f274nm/254nm漢黃芩苷/大黃素=1.11、f274nm/254nm黃芩素/大黃素=1.61、f254nm/254nm蘆薈大黃素/大黃素=1.39、f274nm/254nm漢黃芩

7、素/大黃素=1.73、f254nm/254nm大黃酸/大黃素=1.22、f254nm/254nm大黃酚/大黃素=1.48、f254nm/254nm大黃素甲醚/大黃素=1.00。通過對(duì)RCF進(jìn)行重復(fù)性和耐用性試驗(yàn)，證明在確定的色譜條件下，上述RCF可作為一個(gè)常數(shù)用于梔子金花丸中小檗堿、黃芩中黃酮類和大黃中游離蒽醌類成分的含量計(jì)算。
　　2、本實(shí)驗(yàn)對(duì)梔子金花丸中10個(gè)待測成分的定位方法—保留時(shí)間差（△TR）和相對(duì)保留值（RTR），進(jìn)行

8、了耐用性考察，最終確定了根據(jù)保留時(shí)間差并借助化合物的紫外吸收光譜和梔子金花丸“一測多評(píng)”特征圖譜進(jìn)行定位的方法。最終確定的△tR分別為:△tRA/H=-50.35min、△tRB/H=-42.36min、△tRC/H=-34.42min、△tRD/H=-27.75min、△tRE/H=-19.68min、△tRF/H=-17.73min、△tRG/H=-13.05min、△tRI/H=10.34min、△tRJ/H=16.23min。<

9、br>　　3、對(duì)9種C18填料色譜柱(Spursil、Welchrom、Syncronis、Luna、Topsil、Diamonsil(Ⅱ)、Accurasil、Xtimate、Kromasil)考察了時(shí)間校正法對(duì)待測成分色譜峰的定位效果。選擇校正點(diǎn)（n≥2）時(shí)，其中之一必須為內(nèi)參物。在運(yùn)用該法對(duì)待測成分色譜峰定位時(shí)，由于10個(gè)待測成分為3種不同類型化合物，因此在實(shí)際應(yīng)用時(shí)，可根據(jù)現(xiàn)有對(duì)照品的情況靈活應(yīng)用。試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，校正點(diǎn)的增加并未使

10、定位結(jié)果的準(zhǔn)確性得到相應(yīng)提高，采用大黃素和小檗堿進(jìn)行二點(diǎn)校正，定位效果較好。在采用該法進(jìn)行待測成分定位的同時(shí)，若結(jié)合待測成分的紫外吸收光譜和梔子金花丸的標(biāo)準(zhǔn)圖譜會(huì)使定位準(zhǔn)確度得以大幅提高。
　　4、將建立的梔子金花丸中生物堿、黃酮、蒽醌3類成分QAMS方法用于梔子金花丸的質(zhì)量評(píng)價(jià)，并將QAMS法的計(jì)算值和與外標(biāo)法的測定結(jié)果進(jìn)行比較，二者無顯著性差異，相對(duì)誤差＜5％。
　　研究結(jié)果表明:“一測多評(píng)”質(zhì)量評(píng)價(jià)模式可以應(yīng)用于梔子金