超高壓提取法、一測多評法和對照提取物法在關黃柏中的應用研究.pdf

1、關黃柏為蕓香科植物黃檗Phellodendron amurense Rupr.的干燥樹皮。關黃柏主要活性成分是生物堿,其中最重要的生物堿為小檗堿和巴馬丁,在《中國藥典》2010年版中含量測定規(guī)定鹽酸小檗堿不得少于0.60％,鹽酸巴馬丁不得少于0.30％。本論文對關黃柏進行了兩方面的研究,一方面是超高壓提取關黃柏生物堿的工藝研究;另一方面是一測多評法和對照提取物法測定關黃柏中生物堿含量研究。
　　超高壓提取法作為一種新的提取方法,首

2、次被應用于關黃柏生物堿提取中。在本實驗中,選擇小檗堿和巴馬丁作為檢測指標,先考察單因素(溶劑、壓力、溫度、料液比、溶劑濃度和時間)對提取率的影響,再根據(jù)單因素考察的結(jié)果選擇了四個因素(壓力、溫度、料液比和溶劑濃度)進行正交實驗。通過正交設計實驗結(jié)果得出超高壓提取的最佳條件為:壓力400MPa,溫度40℃,時間4min,料液比30:1和乙醇濃度50％。與加熱回流提取、超聲波提取、索氏提取相比較,超高壓提取有較高的提取率,較少的提取時間,較

3、低的提取溫度和能量消耗。另外,通過掃描電鏡觀察了提取前后關黃柏樣品的細胞結(jié)構(gòu),初步探討超高壓提取的機制,經(jīng)超高壓提取后,細胞表面結(jié)構(gòu)嚴重破壞,形成許多大孔,有利于成分的溶出,從而得到較高的提取率。
　　一測多評法和對照提取物法能很好的解決對照品缺乏和昂貴的問題,為中藥質(zhì)量標準多成分含量測定提供了方法。在一測多評實驗中以小檗堿為對照,建立小檗堿與巴馬丁、藥根堿的校正因子(f藥根堿/小檗堿=0.9868,f巴馬丁/小檗堿=0.9959

4、),并進行含量測定,同時采用外標法測定20個批次關黃柏中3個成分的含量。結(jié)果表明,建立的校正因子重現(xiàn)性良好,采用校正因子計算的含量值與外標法實測值之間無顯著性差異。對照提取物實驗中首先采用動態(tài)軸向壓縮系統(tǒng)(DAC)制備對照提取物(含藥根堿1.15％,巴馬丁13.94％,小檗堿30.77％),再利用含量標化的對照提取物為對照測定20個批次關黃柏中小檗堿、巴馬丁和藥根堿含量,結(jié)果與外標法比較無顯著性差異。因此,在缺少對照品的情況下,一測多評