四組常用抗癌中藥配伍抗lewis肺癌作用及其機制的比較研究.pdf

1、目的:本實驗旨在比較益氣扶正、化痰散結、活血化瘀和清熱解毒四組常用配伍抗癌中藥抗lewis肺癌作用及其機制,為深入認識中醫(yī)藥抗癌機制及臨床合理配伍、提高療效提供科學依據。
　　方法:SPF級C57BL/6小鼠80只,隨機分為空白組、模型組、順鉑組、益氣扶正組(簡稱扶正組)、化痰散結組(簡稱化痰組)、活血化瘀組(簡稱活血組)、清熱解毒組(簡稱解毒組)、聯(lián)合用藥組(簡稱聯(lián)用組),每組10只,除空白組外,各組通過瘤細胞接種建立C57BL

2、/6小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,接種后第2天開始給藥,連續(xù)用藥14天.觀察小鼠一般情況及生活狀態(tài),使用游標卡尺測量腫瘤最長徑(a)和最短徑(b),計算腫瘤體積,繪制生長曲線,于接種后第15天處死全部小鼠,完整剝離移植瘤瘤體,計算抑瘤率;小鼠脾臟稱重,計算脾臟指數(shù);完整取出小鼠肺臟,計數(shù)肺葉表面Lewis肺癌轉移灶數(shù);取部分瘤組織進行病理觀察和采用流式細胞儀分析腫瘤細胞周期及凋亡情況;免疫組化法檢測腫瘤組織中血管內皮細胞生長因子(vas

3、cularendothelialgrowthfactor,VEGF)、內皮抑素(Endostatin,ES)、基質金屬蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)的表達;取血清并以 ELISA法檢測小鼠血清中血管抑素(angiostatin,AS)、ES、VEGF變化,外周血細胞因子白細胞介素-2(interleukin-2, IL-2)、白細胞介素-10(interleukin-,10, IL-10)、

4、γ干擾素(interferongamma,IFN-γ)變化。
　　結果:
　　1.各組肺轉移結節(jié)數(shù)比較:各給藥組肺轉移結節(jié)數(shù)量均低于模型組(P<0.05),以順鉑組和聯(lián)用組最少,兩組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05),除化痰組外(P<0.05),各組與順鉑組相比無顯著性差異(P>0.05)。
　　2.各組抑瘤率比較:與模型組比較,其余各組瘤重均顯著降低(P<0.05);各配伍組比較,對lewis的抑制作用以聯(lián)用組最為明顯

5、,抑瘤率最高。
　　3.各組移植瘤病理HE比較:光鏡下顯示順鉑組及各配伍組細胞較模型組稀疏,呈散在、條索狀分布,均可見不同程度的片狀壞死區(qū)及核固縮、核破碎溶解的現(xiàn)象。
　　4.各組移植瘤細胞周期及凋亡率比較:與模型組比較,其余各組腫瘤細胞在G0/G1期比例增高(P<0.05),凋亡率顯著增加(P<0.01),各配伍組比較,化痰組及解毒組在G0/G1期比例高于聯(lián)用組(P<0.05),但聯(lián)用組凋亡率最高,化痰組和活血組的凋亡率不

6、及聯(lián)用組(P<0.05)。除扶正組及活血組外,其余各組腫瘤細胞在G2/M期的比例明顯減少(P<0.05),但S期細胞變化不明顯。
　　5.各組腫瘤組織VEGF、MMP-2、ES表達水平的比較:順鉑及各配伍組均較模型組 VEGF、MMP-2表達量降低、ES表達量升高,其中解毒組 VEGF表達最低(P<0.05)、聯(lián)用組MMP-2表達量最低(P<0.05)、ES表達量高(P<0.05,P<0.01),而順鉑組表達為水平無明顯變化(P>

7、0.05)。
　　6.各組血清VEGF、AS、ES水平變化比較:各組 VEGF水平較空白組均明顯升高(P<0.05,P<0.01),與模型組比較,順鉑組、各配伍組均顯著降低(P<0.01),以聯(lián)用組和活血組尤為明顯;AS含量,與空白組比較,各組均明顯降低(P<0.01);與模型組比較,順鉑組、各配伍組水平下降程度均較小(P<0.01),以聯(lián)用組和順鉑組最小,解毒組最接近模型組;各組ES水平均較空白組明顯降低(P<0.01);與模型

8、組比較,各組ES水平均有下降,以順鉑組及聯(lián)用組最明顯(P<0.01),扶正組次之。
　　7.各組脾臟指數(shù)及血清IL-2、IFN-γ、IL-10水平變化比較:造模后各組脾臟指數(shù)、IL-2、IFN-γ血清水平均有不同降低,IL-10均有不同程度升高。各配伍組比較研究發(fā)現(xiàn),各配伍組的脾臟系數(shù)均高于Lewis肺癌小鼠模型組及順鉑組(P<0.01),而各配伍之間無明顯差異;在防止IL-2下降方面,扶正組、活血組效果優(yōu)于順鉑組(P<0.05)

9、,各配伍組比較無差異(P>0.05);在防止 IFN-γ含量降低方面,聯(lián)用組效果顯著,優(yōu)于順鉑組及其它配伍組(P<0.05);在防止IL-10升高方面,各配伍組中聯(lián)用組效果最好(P<0.05),其次為活血組(P<0.05)。
　　結論:
　　1.中藥抑瘤作用:各抗癌中藥配伍均對 lewis肺癌移植瘤有抑制作用,其中尤以四組合用效果最好,其作用機制可能存在促進腫瘤細胞凋亡,表現(xiàn)在阻滯細胞于G0/G1期,化痰組和解毒組在阻滯方面

10、效果尤為突出。
　　2.中藥抗血管生成作用(組織):各組抗癌中藥均能抑制lewis肺癌小鼠組織血管生成相關因子VEGF、MMP-2、促ES表達而達到抗腫瘤血管生成作用,其中抑制VEGF表達解毒組最具優(yōu)勢,而降低MMP-2表達水平,提高ES的表達水平方面聯(lián)合使用有協(xié)同增效作用。
　　3.中藥抗血管生成作用(血清):各組抗癌中藥能抑制lewis肺癌小鼠血清VEGF表達及提高 AS、ES的水平以抗血管生成,其中,活血組和扶正組具有