四氯化碳誘導(dǎo)小鼠肝臟組織纖維化的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、從世界范圍來看,飲酒、肝炎病毒感染和非酒精性脂肪性肝炎是促使肝組織慢性損傷發(fā)展形成纖維化、肝硬化和肝癌的三大主要原因。早在20世紀(jì)70年代,就有研究顯示肝臟組織纖維形成是一個(gè)可逆化的過程,Schaffner等也證明肝纖維化是慢性肝損傷發(fā)展進(jìn)程中最后一個(gè)可逆化病理應(yīng)答階段。
　　本研究的目的是,腹腔皮下注射四氯化碳(CCl4,Carbon tetrachloride)誘導(dǎo)小鼠(C57 BL/6)肝組織纖維化的形成,同時(shí),對(duì)照組注射橄

2、欖油(溶劑),誘導(dǎo)期限為15周;首先對(duì)兩組小鼠肝臟組織的全蛋白表達(dá)譜進(jìn)行質(zhì)譜鑒定,發(fā)現(xiàn)并探討纖維化肝組織與正常肝組織在蛋白質(zhì)組水平上的差異,包括差異蛋白表達(dá)譜的分析以及差異蛋白的功能和信號(hào)通路富集分析。
　　方法:實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為兩組,由橄欖油和四氯化碳誘導(dǎo)15周,并分別對(duì)這兩組肝組織的全蛋白表達(dá)譜進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè),本研究應(yīng)用基于肽段峰面積強(qiáng)度的定量方法(Intensity based absolute quantification,

3、or iBAQ),對(duì)鑒定到的蛋白質(zhì)進(jìn)行定量,依照兩組內(nèi)iBAQ值之間的比值對(duì)特定蛋白的表達(dá)變化進(jìn)行評(píng)定,總結(jié)纖維化肝臟組織中差異表達(dá)蛋白譜。應(yīng)用GO(Gene Ontology)功能分類分析和KEGG(Kyoto Enyoolpedia of Genes and Genomes)信號(hào)通路的富集分析方法對(duì)鑒定到的全蛋白表達(dá)譜進(jìn)行差異表達(dá)分析。
　　結(jié)果:在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中,我們分別鑒定到17382和20486條unique肽段,圖譜

4、平均利用率大于50％,共計(jì)鑒定到蛋白4991種(蛋白特異性肽段個(gè)數(shù)至少為1),其中差異表達(dá)蛋白有2135種(差異倍數(shù)大于或等于2),表達(dá)上調(diào)蛋白1264種,下調(diào)蛋白871中。
　　結(jié)論:纖維化肝臟組織中與細(xì)胞外基質(zhì)組成(Extracellular matrix organization)、細(xì)胞骨架組成(Cytoskeleton organization)、有機(jī)磷酸代謝(Organophosphate metabolic proce

5、ss)、細(xì)胞定位(Cellular localization)和細(xì)胞組分調(diào)節(jié)(Regulation of cellular component organization)相關(guān)蛋白的表達(dá)是上調(diào)的;另外,與小分子代謝(Small molecule metabolic process)、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)(Protein transport)和有機(jī)氮化合物的代謝(Organonitrogen compound metabolic process),以

6、及四吡咯的合成過程(Tetrapyrrole biosynthetic process)有關(guān)蛋白的表達(dá)是下調(diào)的。信號(hào)通路富集分析結(jié)果表明,纖維化與 VEGF和T細(xì)胞受體信號(hào)調(diào)節(jié)通路密切相關(guān);四氯化碳誘導(dǎo)組中發(fā)現(xiàn)有20種屬于剪切體的蛋白表達(dá)是下調(diào)的,下調(diào)蛋白中與硫胺素代謝(Thiamine metabolism)、聚糖降解(Other glycan degradation)、SNARE相關(guān)囊泡運(yùn)動(dòng)(SNARE interactions i

7、nvesicular transport)、?；撬岷蛠喤；撬岽x(Taurine and hypotaurine metabolism)、初級(jí)膽酸合成(Primary bile acid biosynthesis)以及泛酸與 CoA的合成(Pantothenate and CoA biosynthesis)通路相關(guān)蛋白的富集度都高于18%,提示,纖維形成,可能與肝組織和神經(jīng)細(xì)胞代謝功能異常是密切相關(guān)的,另外,血管循環(huán)系統(tǒng)的功能異常有可能