穴位局部TRPV參與艾灸鎮(zhèn)痛的外周調(diào)節(jié)機(jī)制.pdf

1、目的：
　　觀察艾灸對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎模型小鼠鎮(zhèn)痛效應(yīng)規(guī)律，明確艾灸鎮(zhèn)痛中TRPV家族的參與及作用機(jī)制，為從分子水平闡述艾灸局部作用的始動(dòng)效應(yīng)機(jī)制，進(jìn)而為揭示艾灸作用原理提供新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.用Von Frey纖維絲篩選基礎(chǔ)痛閾相同的小鼠，分為空白組、空灸組、模型組。模型組均采用足底注射完全弗氏佐劑建立佐劑性關(guān)節(jié)炎（AA）模型，再隨機(jī)分為模型組和模灸組?？站慕M和模灸組分別在“足三里”處艾灸15min

2、，觀察灸后不同時(shí)間點(diǎn)的痛閾。
　　2.采用TRPV阻斷劑RR和激動(dòng)劑2-APB對(duì)AA模型小鼠穴位局部進(jìn)行預(yù)處理，再于“足三里”處艾灸15min，觀察灸后不時(shí)間點(diǎn)痛閾的變化，并于灸后2小時(shí)取材，檢測(cè)“足三里”局部組織中 TRPV1、TRPV2及TRPV3中蛋白表達(dá)量。
　　3.對(duì)生理狀態(tài)和病理狀態(tài)分別給予45℃、40℃及36℃三個(gè)不同溫度的艾灸刺激15min，檢測(cè)灸后2小時(shí)穴位局部中TRPV1、TRPV2及TRPV3的蛋白表達(dá)

3、。
　　4.對(duì)阻斷和激動(dòng)預(yù)處理后的AA模型小鼠分別，給予45℃、40℃及36℃三個(gè)不同溫度的艾灸刺激15min，檢測(cè)灸后2小時(shí)穴位局部中 TRPV1、TRPV2及TRPV3的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.施灸15min后痛閾迅速提高（P＜0.05），并在灸后30min左右達(dá)到高峰，灸后60min痛閾下降，至90min后漸降至灸前水平（P＞0.05）。
　　2.阻斷預(yù)處理AA小鼠灸后15min痛閾上升（P＜0.0

4、5），隨后下降至灸前水平（P＞0.05）。激動(dòng)預(yù)處理AA小鼠灸后15min痛閾上升（P＜0.05），并在灸后30min到90min維持較高水平（P＞0.05），灸后120min痛閾開(kāi)始下降（P＜0.05）。
　　3.灸后穴位局部組織中TRPV1、TRPV2及TRPV3蛋白表達(dá)：
　?。?）空灸組：與空白組相比，TRPV1表達(dá)減少（P＜0.05），TRPV2表達(dá)減少（P＜0.05），TRPV3無(wú)顯著變化。
　?。?）模型

5、組：與空白組相比，TRPV1表達(dá)減少（P＜0.05），TRPV2表達(dá)減少（P＜0.05），TRPV3表達(dá)減少（P＜0.05）。
　　（3）模灸組：與模型組相比，TRPV1表達(dá)增加（P＜0.05），TRPV2無(wú)顯著變化（P＞0.05），TRPV3無(wú)顯著變化（P＞0.05）。
　　4.生理狀態(tài)下，不同溫度灸后TRPV1、TRPV2及TRPV3蛋白表達(dá)：
　?。?）45℃：TRPV1表達(dá)無(wú)顯著變化（P＞0.05）；TRPV2

6、表達(dá)減少（P＜0.05）； TRPV3表達(dá)增加（P＜0.05）；
　?。?）40℃：TRPV1表達(dá)減少（P＜0.05）；TRPV2表達(dá)減少（P＜0.05）；TRPV3表達(dá)無(wú)顯著變化（P＞0.05）；
　?。?）36℃：TRPV1表達(dá)減少（P＜0.05）；TRPV2表達(dá)減少（P＜0.05）；TRPV3表達(dá)無(wú)顯著變化（P＞0.05）。
　　5.病理狀態(tài)下，不同溫度灸后TRPV1、TRPV2及TRPV3蛋白表達(dá)：
　　

7、（1） AA模型小鼠不同溫度灸后TRPV1、TRPV2及TRPV3蛋白表達(dá)：
　　i.45℃：TRPV1表達(dá)增加（P＜0.05）；TRPV2表達(dá)增加（P＜0.05）；TRPV3表達(dá)增加（P＜0.05）；
　　ii.40℃：TRPV1表達(dá)增加（P＜0.05）；TRPV2表達(dá)增加（P＜0.05）；TRPV3表達(dá)增加（P＜0.05）；
　　iii.36℃：TRPV1表達(dá)無(wú)顯著變化（P＞0.05）；TRPV2表達(dá)無(wú)顯著變化（P

8、＞0.05）；TRPV3表達(dá)無(wú)顯著變化（P＞0.05）。
　?。?）阻斷預(yù)處理AA模型小鼠，不同溫度灸后TRPV1、TRPV2及TRPV3蛋白表達(dá)：
　　i.45℃：TRPV1表達(dá)增加（P＜0.05）；TRPV2表達(dá)增加（P＜0.05）；TRPV3表達(dá)增加（P＜0.05）；
　　ii.40℃：TRPV1表達(dá)增加（P＜0.05）；TRPV2表達(dá)增加（P＜0.05）；TRPV3表達(dá)增加（P＜0.05）；
　　iii.

9、36℃：TRPV1表達(dá)增加（P＜0.05）；TRPV2表達(dá)增加（P＜0.05）；TRPV3表達(dá)增加（P＜0.05）；
　　（3）激動(dòng)預(yù)處理AA模型小鼠，不同溫度灸后TRPV1、TRPV2及TRPV3蛋白表達(dá)：
　　i.45℃：TRPV1：45℃灸后，表達(dá)增加（P＜0.05）；TRPV2：45℃灸后，表達(dá)相當(dāng)（P＞0.05）；TRPV3：45℃灸后，表達(dá)相當(dāng)（P＞0.05）；
　　ii.40℃：TRPV1表達(dá)增加（P＜0

10、.05）；TRPV2表達(dá)相當(dāng)（P＞0.05）；TRPV3表達(dá)相當(dāng)（P＞0.05）；
　　iii.36℃：TRPV1表達(dá)相當(dāng)（P＞0.05）；TRPV2表達(dá)增加（P＜0.05）；TRPV3表達(dá)相當(dāng)（P＞0.05）；
　　1.艾灸“足三里”能提高AA小鼠痛閾，鎮(zhèn)痛持續(xù)時(shí)間大約1小時(shí)，連續(xù)多次艾灸具有累積效應(yīng)。
　　2. TRPV家族參與艾灸鎮(zhèn)痛的調(diào)節(jié)：阻斷穴位局部TRPV，艾灸鎮(zhèn)痛效應(yīng)減弱，鎮(zhèn)痛時(shí)間縮短；激動(dòng)穴位局部 TR