凌霄花總黃酮對(duì)大、小鼠短暫腦缺血模型的干預(yù)作用研究.pdf

1、　　目的：探討凌霄花總黃酮對(duì)小鼠短暫腦缺血再灌注模型、小鼠短暫腦缺血發(fā)作(TIA)模型、大鼠TIA模型的影響。通過(guò)觀察凌霄花總黃酮抗氧化、抗炎癥損傷作用和對(duì)能量代謝、血液流變學(xué)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子以及腦組織病理改變的影響,揭示凌霄花總黃酮對(duì)短暫腦缺血模型的作用特點(diǎn)。
　　方法：采用阻斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈(CCA)10min,再灌注15min,復(fù)制小鼠短暫性腦缺血再灌注模型：各組分別灌服大、中、小劑量凌霄花總黃酮混懸液,尼莫地平混懸液,養(yǎng)血

2、清腦顆?；鞈乙?假手術(shù)組、模型組灌服同體積0.1%羧甲基纖維素鈉(CMC)混懸液,每天給藥1次,連續(xù)給藥10d。于第10d給藥后1h,造小鼠短暫性腦缺血再灌注模型,假手術(shù)組只分離CCA,不阻斷血流。再灌注15min后快速斷頭,取腦,分別測(cè)腦勻漿中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、細(xì)胞粘附因子-1(ICAM-1/CD54)含量、HE染色觀察腦組織海馬區(qū)和皮質(zhì)區(qū)的病理形態(tài)變化。
　　采用尾靜脈注射過(guò)氧化叔

3、丁醇(t-BHP)復(fù)制小鼠 TIA 模型。各組分別灌服大、中、小劑量凌霄花總黃酮混懸液,尼莫地平混懸液,養(yǎng)血清腦顆粒混懸液,空白組、模型組灌服同體積 0.1%CMC 混懸液,每天 1 次,連續(xù)給藥10d。在給藥第3、6、9d分別尾靜脈注射t-BHP, 10min后,置于0.45L密封的廣口瓶中,缺氧15min后取出,進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分。于末次造模的第2d灌胃1h后,迅速斷頭,取腦。分別測(cè)定腦勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA

4、)、一氧化氮(NO)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、過(guò)氧化氫酶(CAT)含量、HE染色觀察腦組織海馬區(qū)和皮質(zhì)區(qū)的病理形態(tài)變化。
　　采用尾靜脈注射t-BHP復(fù)制大鼠TIA模型。各組分別灌服大、中、小劑量凌霄花總黃酮混懸液、尼莫地平混懸液、養(yǎng)血清腦顆粒混懸液,模型組和空白組灌服同體積 0.1%CMC。每天 1次,連續(xù)給藥 7d。在給藥第 3、6d分別尾靜脈注射 t-BHP, 10min后,置于 1L密封的廣口瓶中,缺氧 1

5、0min后取出,進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分。于第2次誘發(fā)TIA后第2d給藥1h后,立即眼眶取血,測(cè)凝血時(shí)間、血沉、紅細(xì)胞壓積、全血黏度等血液流變學(xué)指標(biāo)。迅速取腦,測(cè)腦勻漿中乳酸(LD)含量,乳酸脫氫酶(LDH)、三磷酸腺苷(ATP)酶活力并 HE 染色觀察腦組織海馬區(qū)和皮質(zhì)區(qū)的病理形態(tài)變化,免疫組化觀察腦組織成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子( FGF)、胰島素生長(zhǎng)因子( IGF)的變化。
　　結(jié)果：小鼠短暫腦缺血再灌注模型復(fù)制成功,與假手術(shù)組相比,

6、模型組小鼠腦勻漿中 TNF-α、IL-1β、ICAM-1/CD54 含量顯著升高,腦組織海馬區(qū)和皮質(zhì)區(qū)出現(xiàn)明顯水腫、細(xì)胞核固縮等現(xiàn)象,病變神經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著增高。凌霄花總黃酮組能顯著降低模型小鼠腦勻漿中 TNF-α、IL-1β、ICAM-1/CD54含量,顯著減輕腦組織海馬區(qū)和皮質(zhì)區(qū)的神經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù),顯著減輕病理?yè)p傷程度。
　　小鼠TIA模型復(fù)制成功：與空白組相比,模型組小鼠神經(jīng)癥狀評(píng)分顯著升高,腦勻漿中MDA含量、NO水平顯著升

7、高,SOD、 GSH-Px、CAT活力顯著降低,腦組織海馬區(qū)和皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞萎縮、核內(nèi)染色質(zhì)固縮等現(xiàn)象,病變神經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著增高。凌霄花總黃酮組能顯著降低模型小鼠行為學(xué)評(píng)分,顯著降低MDA、NO水平,顯著升高小鼠腦勻漿中GSH-Px、CAT、SOD活力,顯著減輕腦組織海馬區(qū)和皮質(zhì)區(qū)的神經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù),顯著減輕病理?yè)p傷程度。
　　大鼠TIA模型復(fù)制成功：與空白組相比,模型大鼠行為學(xué)評(píng)分、發(fā)作次數(shù)、發(fā)作累計(jì)時(shí)間顯著增高、發(fā)作潛伏時(shí)間顯

8、著縮短；凝血時(shí)間顯著縮短、紅細(xì)胞變形指數(shù)顯著降低,血沉、紅細(xì)胞壓積、血漿粘度、全血黏度、紅細(xì)胞剛性指數(shù)、血沉方程K值顯著升高；腦勻漿LD含量顯著升高,LDH、ATP酶活力顯著降低。腦組織海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)明顯萎縮或消,皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)水腫現(xiàn)象,病變神經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著增高。皮質(zhì)區(qū)FGF、IGF陽(yáng)性表達(dá)有升高趨勢(shì)。凌霄花總黃酮組能顯著降低模型大鼠行為學(xué)評(píng)分、發(fā)作次數(shù)、發(fā)作累計(jì)時(shí)間,顯著延長(zhǎng)發(fā)作潛伏時(shí)間,顯著改善全血流變各項(xiàng)指標(biāo),顯著降低腦勻