毛冬青總皂苷、總黃酮對大、小鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用研究.pdf

1、　　目的：觀察毛冬青總皂苷、總黃酮對腦缺血再灌注損傷動物模型的保護作用。通過研究毛冬青總皂苷、總黃酮對腦缺血再灌注損傷動物模型血液流變學(xué)指標(biāo)全血黏度、腦組織中一氧化氮合酶(NOS)活力和一氧化氮(NO)含量、血清中白細胞介素-1β(IL-1β)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)含量以及血漿中內(nèi)皮素(ET)水平、NOS、和、NO、腦組織中 SOD、MDA、谷胱甘肽過氧化酶(GSH—Px)含量、腦組織中神經(jīng)營養(yǎng)因子 BDNF和腦組織中血管內(nèi)皮

2、細胞因子 VEGF,并觀察腦組織形態(tài)學(xué)的變化,從而探討毛冬青總皂苷、總黃酮對腦缺血再灌注損傷的保護作用及特點。
　　方法：小鼠腦缺血再灌注：采用阻斷雙側(cè)頸總動脈血流10min,恢復(fù)灌流10min,再次阻斷雙側(cè)頸總動脈10min方法,建立小鼠腦缺血再灌注損傷模型。手術(shù)前,金納多組、尼莫地平組與毛冬青總皂苷、總黃酮大、中、小劑量組分別給予相應(yīng)的藥物灌胃,假手術(shù)組、模型組同時給予同體積 0.1%CMC 灌胃,每天 1 次,連續(xù)給藥1

3、1d。末次給藥1h后造模,手術(shù)后再灌注24h,取腦測定小鼠腦組織中NO、NOS、ATP酶及觀察腦組織形態(tài)學(xué)變化。
　　小鼠血瘀合并腦缺血再灌注：采用阻斷雙側(cè)頸總動脈血流 10min,恢復(fù)灌流10min,再次阻斷雙側(cè)頸總動脈 10min,及造血瘀各組每天肌肉注射地塞米松(地塞米松 0.8mg/kg,連續(xù)注射 15d)造血瘀,建立小鼠血瘀合并腦缺血再灌注損傷模型。手術(shù)前金納多組、尼莫地平組,大、中、小劑量毛冬青總皂苷、總黃酮組分別

4、給予相應(yīng)的藥物灌胃,假手術(shù)組、血瘀模型組、手術(shù)模型組、血瘀加手術(shù)模型組同時給予同體積 0.1%CMC灌胃,每天1次,連續(xù)給藥16d。末次給藥1h后造模,手術(shù)后再灌注24h,取血測全血黏度,取腦測定小鼠腦組織中NO、NOS, ATP酶及腦組織形態(tài)學(xué)變化。
　　大鼠局灶腦缺血再灌注：采用線栓法阻塞左側(cè)大腦中動脈,建立大鼠局灶腦缺血再灌注損傷模型。手術(shù)前,金納多組、尼莫地平組、毛冬青總皂苷、總黃酮大、中、小劑量組分別給予相應(yīng)的藥物灌

5、胃,假手術(shù)組、模型組同時給予同體積0.1%CMC灌胃,每天1次,連續(xù)給藥6d。于末次給藥1h后,造模。本實驗為兩批,第一批動物手術(shù)清醒后,評估大鼠神經(jīng)功能缺失,再灌注24h后,血漿中NO、NOS、ET及腦 TTC 染片。再灌注 24h 后,評估大鼠神經(jīng)功能缺失,測定大鼠血清中 IL-1β 和 TNF-α的含量,腦組織 SOD、MDA 及 GSH-Px 酶的含量,免疫組化觀察神經(jīng)因子( BDNF、VEGF)及光鏡觀察腦組織形態(tài)學(xué)變化,透射

6、電鏡觀察大鼠腦組織亞微結(jié)構(gòu)的變化。
　　結(jié)果：小鼠腦缺血再灌注損傷模型：模型復(fù)制成功,小鼠腦勻漿中 NOS的活力和NO的含量顯著或明顯升高,ATP酶活性顯著降低,減輕病理組織切片神經(jīng)細胞損傷。
　　小鼠血瘀合并腦缺血再灌注損傷模型：各個模型組模型均復(fù)制成功,血瘀、手術(shù)及血瘀加手術(shù)模型組動物全血黏度顯著升高,手術(shù)模型組和血瘀合并腦缺血模型動物腦組織中NOS的活力和NO的含量顯著或明顯升高,ATP酶活性顯著降低,減輕病理

7、組織切片神經(jīng)細胞損傷。
　　大鼠局灶腦缺血再灌注損傷模型：模型復(fù)制成功,明顯或顯著降低模型動物神經(jīng)功能評分；血漿中NOS的活力、NO的含量和內(nèi)皮素含量顯著或明顯升高；血清中 IL-1β、TNF-α含量、腦組織 MDA 水平顯著或明顯升高；腦組織中 SOD水平、SGH-PX酶活力顯著或明顯降低；腦組織海馬區(qū) BDNF明顯降低；腦組織海馬區(qū)VEGF明顯升高。
　　實驗結(jié)果表明：毛冬青總皂苷對小鼠腦缺血再灌注模型的作用優(yōu)于

8、毛冬青總黃酮,毛冬青總黃酮對小鼠血瘀再灌注模型及大鼠局灶性腦缺血再灌注模型作用優(yōu)于總皂苷。
　　結(jié)論：毛冬青總黃酮、總皂苷可通過改善小鼠血瘀腦缺血再灌注模型血液流變學(xué)；明顯或顯著降低NOS活力、NO水平、IL-1β、TNF-α含量及MDA水平；適度升高其 ATP 酶活性、SOD、SGH-PX 酶活力、BDNF,可明顯改善實驗大鼠神經(jīng)功能缺失評分,減少梗死面積,明顯減輕缺血損傷,改善,大腦皮質(zhì)及海馬區(qū)的病變情況,從而減輕腦組織缺