伴放線放線桿菌在齦下菌斑中的分布及其細胞膨脹致死毒素的研究.pdf

1、牙周炎是一種慢性細菌感染性疾病，能引起牙周結締組織的破壞和牙槽骨吸收，導致牙齒松動、脫落。伴放線放線桿菌(Actinobacillusactinomycetemcomitans，A．actinomycetemcomitans)是目前公認的牙周炎主要致病菌之一,A．actinomycetemcomitans又被稱為伴放線菌嗜血菌(Haemophilusactinomycetemcomitans)，主要存在于齦下菌斑中，能合成分泌多種細胞毒

2、力因子。大量研究發(fā)現，A．actinomycetemcomitans和局限型侵襲性牙周炎(localizedaggressive periodontitis，LAP)密切相關。在慢性牙周炎(chronic periodontitis，CP)患者和牙周健康者的齦下菌斑中也經常檢測到A．actinomycetemcomitans的存在，但國內外學者對其在慢性牙周炎患者和牙周健康者齦下菌斑中分布的研究結果差異較大。 為了探索A．act

3、inomycetemcomitans在慢性牙周炎患者和牙周健康者齦下菌斑中的分布規(guī)律，本研究采用了目前國際通用的16S rRNA聚合酶鏈反應(16Sribosomal RNA polymerase chain reaction，16S rRNA PCR)技術，檢測慢性牙周炎患者和健康人齦下菌斑中A．actinomycetemcomitans的攜帶率，并分析了A．actinomycetemcomitans分布與牙周臨床指標的關系。

4、 本研究第一部分應用16S rRNA PCR技術檢測慢性牙周炎患者和牙周健康者齦下菌斑中的A.actinomycetemcomitans，結果發(fā)現中重度牙周炎患牙位點的A．actinomycetemcomitans檢出率為33．62％，顯著高于慢性牙周炎患者相對健康牙和牙周健康者健康牙的位點檢出率(P<0．05)；男性和女性慢性牙周炎患者的A．actinomycetemcomitans位點檢出率沒有統(tǒng)計學差異，但年輕患者的位點檢出率明顯

5、高于中、老年患者(P<0．05)。 A．actinomycetemcomitans在牙周組織破壞嚴重的患牙位點檢出率要高于破壞較輕的位點。A．actinomycetemcomitans在PD>7mm的牙周炎患牙位點的檢出率顯著高于PD 4～6mm的位點，而PD 4～6mm的患牙位點A．actinomycetemcomitans檢出率又顯著高于PD≤4mm的位點(P<0．05)。CAL對A．actinomycetemcomitan

6、s檢出率的影響也呈相同趨勢，CAL≥6mm的患牙位點檢出率最高，3-5mm次之，CAL≤3mm的患牙位點A．actinomycetemcomitans檢出率最低(P<0．05)。此外，在BOP陽性位點的檢出率高于陰性位點，說明A．actinomycetemcomitans在炎癥活躍期位點的分布較多。 A．actinomycetemcomitans能合成分泌多種細胞毒力因子，其中細胞膨脹致死毒素(cytolethal disten

7、ding toxin，CDT)是一種由三個蛋白亞基組成的異聚體，具有引起細胞形態(tài)改變、細胞周期阻滯、誘導淋巴細胞凋亡和刺激炎性細胞因子分泌的功能。目前，細胞膨脹致死毒素與A．actinomycetemcomitans致病性的關系已引起國外學者的廣泛關注，而國內尚未見相關報道。 本研究第二部分采用PCR技術擴增出A．actinomycetemcomitans基因組中的CDT編碼基因cdtABC，將獲取的基因片斷通過TA克隆、限制性

8、酶切和連接，構建出pQE60-cdtABC重組質粒。測序報告證實重組質粒中嵌入的cdtABC基因和原始序列的同源性高達99％。用重組質粒轉染E coli感受態(tài)細胞，并用誘導劑誘導重組CDT蛋白的表達，通過SDS-PAGE和Western blot檢測，發(fā)現E. coli感受態(tài)細胞的總蛋白中有重組CDT蛋白的表達。綜上所述，慢性牙周炎患者中患牙位點的A．actinomycetemcomitans檢出率顯著高于慢性牙周炎患者的相對健康位點和

9、牙周健康者的位點檢出率。A．actinomycetemcomitans在年輕的慢性牙周炎患者中檢出率高于中、老年患者，而且它的檢出率還隨著牙周組織破壞程度的加重而升高。本研究進一步利用PCR技術克隆出編碼A．actinomycetemcomitans CDT的cdtABC基因，通過TA克隆成功構建了pQE60-cdtABC載體，并在大腸桿菌感受態(tài)細胞中成功表達出重組CDT蛋白，為進一步研究CDT蛋白的生物學活性和細胞信號轉導機制以及A.