抗癇神丹對戊四唑點(diǎn)燃癲癇大鼠腦內(nèi)γ-氨基丁酸、谷氨酸含量及海馬c-fos表達(dá)的影響.pdf

1、目的：癲癇是一種慢性反復(fù)發(fā)作性短暫性腦功能失調(diào)綜合征，以1～14的兒童為多見，因反復(fù)發(fā)作，社會(huì)歧視，長期服用抗癇西藥(AEDs)易產(chǎn)生許多毒副作用等而使患者及其家屬背負(fù)著沉重的身心和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，因此，研制出一種廉價(jià)、高效、無毒副作用的藥物是當(dāng)今醫(yī)務(wù)工作者亟待解決的問題。而中醫(yī)藥則在解決這一世界性醫(yī)學(xué)難題方面有著獨(dú)特的優(yōu)勢。 導(dǎo)師在經(jīng)過多年研究之后，認(rèn)為小兒本有脾常不足的生理特點(diǎn)，加之若嗜食肥甘、油膩則引起濕聚而生痰，痰濁阻于中焦，

2、則易致食積，食積痰濁久而化熱，火熱灼津復(fù)又生痰，所以說痰、熱、食積三者相互影響、互為因果，共同導(dǎo)致了本病的發(fā)生。因此，創(chuàng)立了“消食祛痰，涼血熄風(fēng)”的治癇之法?？拱B神丹即在此理論的指導(dǎo)下，結(jié)合現(xiàn)代藥理學(xué)研究，由羚羊角粉、雙鉤、橘紅、絲瓜絡(luò)、全蝎、地龍、焦三仙等中藥合理組方而成，臨床應(yīng)用十余年，療效可靠，本實(shí)驗(yàn)擬通過傳統(tǒng)中醫(yī)理論和現(xiàn)代科研技術(shù)相結(jié)合，以戊四唑點(diǎn)燃癲癇大鼠為模型，通過觀察抗癇神丹對癲癇大鼠腦內(nèi)γ-氨基丁酸、谷氨酸及海馬c-fo

3、s表達(dá)的影響來深入探討該方治療癲癇的機(jī)理，為防治癲癇提供新的手段和方法。 方法：8周齡健康SD大鼠(200±50g)50只，適應(yīng)性飼養(yǎng)3天，隨機(jī)取10大鼠作為正常對照組，余者采用戊四唑(PTZ)腹腔注射法致癇，每日1次腹腔注射戊四唑(32mg/kg)，持續(xù)28天，停藥1周后用相同劑量PTZ測試，按著Ono J等的分級(jí)方法，凡顯示連續(xù)5次2級(jí)以上驚厥的大鼠為達(dá)到點(diǎn)燃標(biāo)準(zhǔn)，入選實(shí)驗(yàn)。最后戊四唑共成功誘導(dǎo)出癲癇大鼠36只，造模成功率9

4、0％，隨機(jī)分配給模型組、抗癇神丹大劑量組、抗癇神丹小劑量組，丙戊酸鈉組每組各9只?？拱B神丹大、小劑量組，分別灌服抗癇神丹濃縮水煎劑每次15g/kg、7.5g/kg，VPA(丙戊酸鈉)組，灌服丙戊酸鈉每次400mg/kg，正常對照組、模型組灌服生理鹽水，每次1ml，以上藥物均為每日2次，療程28天。造模期間詳細(xì)記錄大鼠驚厥情況，并于最后1次給藥后1小時(shí)處死所有大鼠，立即進(jìn)行已擬定指標(biāo)的測定。 結(jié)果： (1)造模過程中驚厥發(fā)

5、作情況：四組造模大鼠在戊四唑腹腔注射第11天后陸續(xù)出現(xiàn)不同等級(jí)的驚厥發(fā)作。第14日注射戊四唑后驚厥潛伏期時(shí)間約12分鐘，驚厥發(fā)作持續(xù)時(shí)間約8分鐘，隨著注射次數(shù)的增加，潛伏期逐漸縮短，而驚厥發(fā)作持續(xù)時(shí)間則逐漸延長，第21日注射戊四唑后潛伏期時(shí)間約為5分鐘，驚厥發(fā)作時(shí)間約18分鐘。第28日注射戊四唑后，潛伏期時(shí)間約2分鐘，驚厥發(fā)作持續(xù)時(shí)間約36分鐘，造模期間除因4只大鼠因驚厥過度而死亡外，共有36只大鼠于第23日全部被點(diǎn)燃，發(fā)作級(jí)別均在II

6、級(jí)以上。 (2)抗癇神丹對戊四唑點(diǎn)燃大鼠驚厥率的影響：抗癇神丹大劑量組、VPA組與模型組抗驚厥率比較有顯著性差異，抗癇神丹小劑量組抗驚厥率高于模型組，有顯著性意義，而低于高劑量組及VPA組。說明抗癇神丹及丙戊酸鈉都具有顯著的抗驚厥作用，抗癇神丹的抗癲癇效果還與劑量存在依賴性(正相關(guān))。 (3)抗癇膠囊對戊四唑點(diǎn)燃大鼠發(fā)作級(jí)別的影響：給藥第7天VPA組發(fā)作級(jí)別較模型組顯著降低，說明丙戊酸鈉起效較快。給藥第14、21、28天

7、抗癇神丹大劑量組、VPA組均較模型組顯著降低?？拱B神丹大劑量組在給藥第28天時(shí)和給藥前與給藥第7、14天相比有顯著差異，VPA組在給藥第28天時(shí)和給藥前，給藥第7、14天相比有顯著性差異，抗癇神丹小劑量組給藥28天時(shí)和給藥前，給藥第14、21天相比有顯著性差異，說明抗癇神丹及丙戊酸鈉均有降低驚厥發(fā)作級(jí)別的作用?？拱B神丹大、小劑量組在給藥14天時(shí)相比有顯著性差異。 (4)抗癇神丹對戊四唑點(diǎn)燃大鼠驚厥發(fā)作潛伏期的影響：模型組的驚厥潛

8、伏期隨時(shí)間的變化而逐漸縮短，給藥前和給藥第14、21、28天比較，給藥第7天和第28天比較有顯著性差異，表明點(diǎn)燃效應(yīng)在一定時(shí)間內(nèi)可逐漸加強(qiáng)，使驚厥發(fā)作閾值降低潛伏期變短?？拱B神丹大、小劑量組及VPA組潛伏期則隨著給藥時(shí)間的推移逐漸延長，抗癇神丹大劑量組給藥前與給藥第21天、28天比較有顯著性差異，給藥第7天和給藥21、28天比較有顯著性差異?？拱B神丹小劑量組給藥前與給藥第21天，第28天相比有顯著性差異，VPA組給藥前與給藥第7天相比有

9、顯著性差異，表明抗癇神丹與丙戊酸鈉均有一定的提高驚厥發(fā)作閾值延長潛伏期的效應(yīng)。 (5)抗癇神丹對戊四唑點(diǎn)燃大鼠驚厥發(fā)作持續(xù)時(shí)間的影響：模型組大鼠驚厥發(fā)作持續(xù)時(shí)間隨著時(shí)間的推移逐漸延長，也表明點(diǎn)燃效應(yīng)在一定時(shí)間內(nèi)逐漸增強(qiáng)，從給藥第7天到給藥第28天，模型組和抗癇神丹大，VPA組和小劑量組比較均有顯著性差異，說明抗癇神丹、丙戊酸鈉均有縮短大鼠驚厥發(fā)作持續(xù)時(shí)間的作用，抗癇神丹大劑量組在給藥第14天時(shí)和抗癇神丹小劑量組比較有顯著差異，抗

10、癇神丹在給藥前和給藥第14天、21天自身相比，第7天和第2l天相比均有顯著性差異，抗癇神丹小劑量組給藥前和給藥第14天相比有顯著性差異。 (6)抗癇神丹對戊四唑點(diǎn)燃大鼠大腦皮質(zhì)及海馬γ-氨基丁酸含量的影響：與正常組相比，模型組大腦皮質(zhì)及海馬GABA含量減低且差異顯著，經(jīng)給藥治療后，抗癇神丹大劑量組、VPA組與模型組大腦皮質(zhì)及海馬GABA相比均升高且有顯著性差異，與正常組比較無顯著差異，與抗癇神丹小劑量組比較有顯著性差異，抗癇神丹

11、大劑量組與VPA組比較無顯著性差異。 (7)抗癇神丹對戊四唑點(diǎn)燃大鼠大腦皮質(zhì)及海馬谷氨酸含量的影響：與正常組相比，模型組大腦皮質(zhì)及海馬Glu含量升高且差異顯著，經(jīng)給藥治療后，抗癇神丹大劑量組、VPA組與模型組大腦皮質(zhì)及海馬Glu相比均降低且有顯著性差異，與正常組比較無顯著差異，與抗癇神丹小劑量組比較有顯著性差異，抗癇神丹大劑量組與VPA組比較無顯著性差異。 (8)抗癇神丹對海馬c-fos表達(dá)的影響：測定熒光強(qiáng)度顯示，模型

12、組分別比較正常組、抗癇神丹大、小劑量組和VPA組均有顯著性差異。正常組與抗癇神丹大劑量組分別比較抗癇神丹小劑量組和VPA組，均有顯著性差異，正常組與大劑量組比較無顯著性差異，VPA組與小劑量組比較無顯著性差異，熒光指數(shù)結(jié)果與熒光強(qiáng)度一致，表明抗癇神丹能明顯降低PTZ致癇大鼠海馬c-fos的表達(dá)。 結(jié)論： 1.抗癇神丹對戊四唑點(diǎn)燃大鼠驚厥發(fā)作有明顯的拮抗作用，其作用機(jī)理可能是通過降低戊四唑點(diǎn)燃大鼠海馬Glu含量、c-fos