戊四氮致癇大鼠馬c-FOS表達(dá)及鈣拮抗劑的影響.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文戊四氮致癇大鼠馬cFOS表達(dá)及鈣拮抗劑的影響姓名：包穎穎申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：丁美萍2000.5.1深麻醉動(dòng)物(方法同上)，以后各步驟同對(duì)照組。第5、6組，為干預(yù)組(n5=10，n6=9)，腹腔注射尼莫地平針劑(尼莫通)Img／kg(10mg／50m1)，I5min后腹腔注射PTZ劑量同致癇組，觀察并記錄癲癇發(fā)作潛伏期和癲癇發(fā)作強(qiáng)度，分別在給PTZ后2h、4h深麻醉動(dòng)物(方法同上)，以后各步驟同對(duì)

2、照組。(二)癲癇發(fā)作的觀察：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中觀察并記錄大鼠的癲癇發(fā)作情況，將腹腔注射PTZ至出現(xiàn)行為改變間的時(shí)間記為潛伏期。癲癇發(fā)作強(qiáng)度采用Racine分級(jí)(1972年)：0級(jí)(R=0)。無(wú)運(yùn)動(dòng)性癲癇發(fā)作活動(dòng)；l級(jí)(R=1)，節(jié)律性嘴和面部抽動(dòng)；II級(jí)(R=2)，點(diǎn)頭或甩尾；III級(jí)(R=3)，單肢抽動(dòng)；Iv級(jí)(R=4)，多肢抽動(dòng)或強(qiáng)直：v級(jí)(R=5)，跌倒，全面性強(qiáng)直陣攣發(fā)作。(三)免疫組織化學(xué)染色和定量分析：取大鼠腦組織經(jīng)漏斗的冠狀截面

3、，制作腦部冠狀石蠟切片，厚49in，采用過(guò)氧化酶標(biāo)記的鏈霉卵白素染色試劑盒法進(jìn)行免疫組化染色，具體步驟為：石蠟切片常規(guī)脫蠟至水一將切片放入煮沸的10mM檸檬酸鹽緩沖液(pH=6)中繼續(xù)煮沸10min一室溫下自然冷卻20min一蒸餾水洗2次，PBS洗2次一3％過(guò)氧化氫室溫下孵育10min，消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性一蒸餾水沖洗，PBS洗2次一正常山羊血清室溫孵育30min一傾去血清，加入1009ll：100稀釋的抗cFOS蛋白多克隆抗體，