雪旺細(xì)胞的分離培養(yǎng)及RGD復(fù)合材料促進(jìn)周圍神經(jīng)修復(fù)作用的研究.pdf

1、雪旺細(xì)胞(SCs)是周圍神經(jīng)系統(tǒng)一種重要的膠質(zhì)細(xì)胞，能形成有髓神經(jīng)纖維和無(wú)髓神經(jīng)纖維的神經(jīng)內(nèi)膜，具有多種生理功能，增生的雪旺細(xì)胞能分泌產(chǎn)生多種促進(jìn)神經(jīng)再生修復(fù)的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子與細(xì)胞粘附分子。隨著組織工程的發(fā)展，在構(gòu)建的神經(jīng)導(dǎo)管支架材料上種植雪旺細(xì)胞，移植入體可以促進(jìn)軸突生長(zhǎng)，從而促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)，但如何快速獲取大量雪旺細(xì)胞是移植的關(guān)鍵。人工合成的神經(jīng)導(dǎo)管已被廣泛證明可以促進(jìn)神經(jīng)再生，具有良好細(xì)胞親和性，能長(zhǎng)期持續(xù)釋放神經(jīng)生長(zhǎng)因子的生物材料逐漸

2、成為周圍神經(jīng)組織工程的研究熱點(diǎn)。 本文探討出一種可在短時(shí)間內(nèi)分離培養(yǎng)成年大鼠雪旺細(xì)胞的方法，并能使其純度達(dá)到90％以上，數(shù)量在10<'6>/ml以上，來滿足臨床上修復(fù)周圍神經(jīng)損傷的需要。本實(shí)驗(yàn)通過預(yù)變性大鼠坐骨神經(jīng)7天后，依次應(yīng)用組織塊種植法，快速酶消化法和雙差速貼壁，對(duì)得到的細(xì)胞進(jìn)行分離純化，通過鏡下胎盼藍(lán)細(xì)胞計(jì)數(shù)和S-100免疫組化染色鑒定，對(duì)分離得到的原代雪旺細(xì)胞進(jìn)行數(shù)量計(jì)算和純度計(jì)算，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示通過此法得到的雪旺細(xì)胞的

3、數(shù)量和純度均能達(dá)到組織工程化人工神經(jīng)的實(shí)驗(yàn)要求。 利用各種神經(jīng)導(dǎo)管可成功橋接修復(fù)短段周圍神經(jīng)缺損已被許多實(shí)驗(yàn)所證明，應(yīng)用組織工程技術(shù)構(gòu)建神經(jīng)導(dǎo)管，為修復(fù)長(zhǎng)段周圍神經(jīng)缺損提供了新的方法和思路。本實(shí)驗(yàn)以聚乳酸為基體材料，接枝了RGD多肽，添加了一定比例的β-TCP和神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)，制備出一種新型的具有良好降解性能和藥物釋放性能的復(fù)合型神經(jīng)導(dǎo)管。通過對(duì)RGD復(fù)合導(dǎo)管材料進(jìn)行體外模擬降解實(shí)驗(yàn)，測(cè)定降解過程中浸泡液pH值的變化及材

4、料質(zhì)量損失率，顯示PLA降解速度最慢，24周后膜質(zhì)量損耗率僅為25％左右，PRGD/PLA，PRGD/PLA/TCP和PRGD/PLA/TCP/NGF膜降解速度相當(dāng)，在24周時(shí)膜損耗率已超過50％。PRGD/PLA膜較PRGD/PLA/TCP，PRGD/PLA/TCP/NGF兩組材料pH值下降較快，四種材料的浸泡液在24周內(nèi)PH值基本呈下降趨勢(shì)，PRGD/PLA/TCP和PRGD/PLA/TCP/NGF兩組材料在第2周左右達(dá)6.8，呈微