安徽省飼料中重金屬的現(xiàn)狀及As、Pb、Hg、Cr對(duì)HepG2細(xì)胞毒性研究.pdf

1、本論文調(diào)查了安徽地區(qū)不同類型飼料重金屬含量，并通過等效應(yīng)圖解法對(duì)常見重金屬聯(lián)合作用肝臟癌細(xì)胞（Human liver carcinoma cells，HepG2）進(jìn)行評(píng)估，旨在研究不同組合重金屬的聯(lián)合效應(yīng)，為重金屬對(duì)動(dòng)物體機(jī)體的損傷提供依據(jù)。通過氧化損傷測定聯(lián)合作用較為明顯的砷和鉛對(duì)肝臟癌細(xì)胞的影響情況，為重金屬作用機(jī)體的毒性以及損傷機(jī)制提供參考。該研究主要從以下方面進(jìn)行：
　　1．通過 ICP-MS儀器對(duì)安徽省豬、雞、鴨等養(yǎng)殖場

2、不同種類的配合飼料進(jìn)行抽樣檢測。結(jié)果表明在不同種類飼料中都有一定含量的重金屬如：汞（Hg）、鉻（Cr）、鉛（Pb）、砷（As）、鎘（Cd）等。其中砷、汞、鉻、鉛在哺乳仔豬前期配合飼料含量分別為0.15、0.038、1.19、2.66 mg/kg。2014年第一次抽檢發(fā)現(xiàn)肉用仔雞中期配合飼料含量分別為0.14、0.043、3.14、2.0 mg/kg，在魚類混合料中0.27、0.033、3.43、3.76 mg/kg。檢測發(fā)現(xiàn)不同樣品中砷

3、的含量范圍為0.11-0.23 mg/kg；汞的含量范圍為0.039-0.053 mg/kg；鉻的含量范圍為1.01-2.56 mg/kg；鉛的含量范圍為0.29-4.31 mg/kg。試驗(yàn)表明，在魚類、禽類以及魚類飼料中As、Hg、Cr和Pb等普遍存在，檢測中As、Hg、Cr和Pb含量較低沒有超出國家標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)象。
　　2．As、Hg、Cr和Pb對(duì)HepG2細(xì)胞的交互作用：通過MTT法對(duì)As、Hg、Cr和Pb作用于HepG2細(xì)胞聯(lián)合

4、毒性進(jìn)行研究。結(jié)果表明當(dāng)HepG2細(xì)胞分別暴露在As(2.65-4.65?g/ml)、Hg(2.65-4.65?g/ml)、Cr(40-70?g/ml)和Pb(160-280?g/ml)時(shí)，細(xì)胞活性分別由95％降低到36%,75%降低到42%，76%降低到22%，94%降低到12%。As、Hg、Cr、Pb的半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為4.20、4.06、56.22、228.02?g/ml。重金屬聯(lián)合作用時(shí)細(xì)胞活力顯著降低，并呈劑量依賴

5、關(guān)系。根據(jù)IC50的大小對(duì)比細(xì)胞毒性如下：As+Hg< Hg+Cr

6、-3.97、2.72-3.92、2.48-3.71表現(xiàn)為拮抗效應(yīng)。Cr+Pb、As+Cr+Pb和As+Hg+Cr+Pb的聯(lián)合指數(shù)（CI）分別為0.002-0.25、0.002-0.045、0.02-1.14表現(xiàn)為協(xié)同效應(yīng)。
　　3．為了研究As和Pb單獨(dú)以及聯(lián)合作用對(duì)人肝癌細(xì)胞（HepG2）毒性作用和細(xì)胞氧化損傷的機(jī)制，采用不同濃度的As（2.65、3.15、3.65、4.15和4.65 g/ml）和Pb（160、190、220、

7、250和280g/ml）以及質(zhì)量濃度比為1∶55的As+Pb處理HepG2細(xì)胞24、48和72 h，使用MTT法檢測細(xì)胞活力；細(xì)胞培養(yǎng)24 h后測定細(xì)胞活性氧（ROS）、乳酸脫氫酶（LDH）、丙二醛（MDA）和還原性谷胱甘肽（GSH）的相對(duì)表達(dá)量變化。MTT結(jié)果表明：As、Pb和As+Pb的24、48和72 h半數(shù)抑制濃度（IC50），As在24、48和72 h的IC50分別為4.20、4.03和3.74 g/mL；Pb在24、48和7

8、2 h的IC50分別為228.01、205.46和203.40 g/mL；As+Pb在24、48和72 h的IC50分別為3.10、3.17和3.18 g/mL。3組處理分別作用HepG2細(xì)胞24、48和72 h表現(xiàn)出顯著的生長抑制（P＜0.05），且細(xì)胞毒性與時(shí)間和濃度呈正相關(guān)性。當(dāng) As、Pb、As+Pb作用HepG2細(xì)胞誘導(dǎo) ROS、LDH和MDA水平顯著升高（P＜0.05），GSH的含量顯著降低（P＜0.05）。綜上所述：As+