曲格列酮對HepG2及其CD133肝癌干細胞的細胞毒性差異研究.pdf

1、目的：分離與鑒定肝癌細胞HepG2中CD133標記的肝癌干細胞；初步探討曲格列酮（Tro）對HepG2及其肝癌干細胞的細胞毒性差異。
　　方法：利用流式細胞分選儀分選純化HepG2中的CD133陽性和陰性細胞，無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)分選后細胞亞群；通過利用流式細胞儀和Western blot實驗檢測分選前后CD133表達和干性相關蛋白Oct4和c-Myc的表達；采用懸浮微球形成法，平板克隆形成法和Transwell侵襲和遷移，BALB/

2、c裸鼠體內成瘤實驗及其腫瘤組織的免疫組化和HE染色，細胞周期的檢測增殖能力和MTT法測定肝癌干細胞的耐藥性來共同鑒定肝癌干細胞；通過CCK8法對比Tro與鹽霉素對CD133肝癌干細胞毒性情況；全自動生化分析儀測定Tro對細胞上清AST、ALT、LDH、ALB、BUN、TP生化指標的變化，熒光法檢測Tro對CYP酶總活性和ROS水平的影響，Western blot法分析藥物處理后CYP1A2的變化；流式細胞儀分析Tro處理后的細胞周期和細

3、胞凋亡變化來研究Tro顯示的細胞毒性差異。
　　結果： CD133型腫瘤干細胞在HepG2中占（0.72±0.05）％，CD133+細胞分選后純度為98.7%；CD133+細胞中CD133、c-Myc和Oct4表達不同程度高于親本細胞；CD133+細胞微球形成力，克隆形成力以及Transwell遷移與侵襲能力等明顯高于親本細胞，且CD133+細胞腫瘤形成能力顯著升高。同時，CD133+細胞群大多處于G0/G1期，G2/M期未得到阻

4、滯，并且對索菲替尼表現較大耐藥性；Tro處理12 h，24 h，48 h，72 h后，肝癌干細胞IC50為（150.52±1.25）μmol/L，（99.08±1.90）μmol/L，（43.96±0.71）μmol/L和（14.81±1.30）μmol/L，顯著低于HepG2，具有明顯量效-關系，顯示有統(tǒng)計學差異；Tro處理48 h時，肝癌干細胞上清 AST、TP、LDH、ALB、BUN生化指標不同程度升高，其中LDH升高水平較親本細

5、胞高；CYP450總活性和ROS水平出現明顯抑制，CYP1A2抑制程度隨濃度增加。在細胞凋亡中Tro能夠引起CD133+細胞發(fā)生早期凋亡和壞死，顯著高于親本細胞，顯示較大Tro的細胞毒性差異；在對細胞周期影響中，Tro能較少GO/G1期細胞比重，增加S期和G1/M期，顯示較大Tro的細胞選擇毒性差異。
　　結論：成功篩選和鑒定具有高增殖能力的CD133+HepG2腫瘤干細胞，在Tro引起肝細胞毒性方面較HepG2細胞更為敏感性，顯