乙肝病毒攜帶者外周血單個核細胞TLR2、4與乙肝病毒增殖的相關性研究.pdf

1、目的：通過檢測乙肝病毒攜帶者(ASC)乙肝病毒(HBV)的增殖情況和外周血單個核細胞(PBMC)TLR2、4的表達與活化情況，以探討HBV增殖與TLR2、4表達水平的相關性，從而為進一步了解機體抗乙肝病毒感染的免疫功能狀態(tài)及今后開展免疫治療研究提供依據(jù)。 方法：采集乙肝病毒攜帶者和健康志愿者靜脈血，分三部分進行實驗：第一部分非抗凝血樣本分離血清，通過時間分辨熒光免疫分析兩對半、肝功能分析儀檢測肝功能、熒光定量PCR檢測HBV D

2、NA拷貝數(shù)，結(jié)果用于分組：即HBeAg(+)組、HBeAg(一)組、正常對照組；第二部分抗凝血用Optiprep<'TM>混合法分離PBMC：分別以TLR2、4抗體作為一抗，用免疫細胞化學方法(ICC)染色測定PBMC表面TLR2、4蛋白水平的表達情況，再以RT-PCR方法測定PBMC TLR2 mRNA的表達情況；第三部分非抗凝血樣本分離血清，檢測TLR活化產(chǎn)物TNF-α的表達水平。 結(jié)果：(1)乙肝病毒攜帶者體內(nèi)HBeAg的

3、狀態(tài)與HBV DNA的拷貝數(shù)存在相關性：HBeAg(+)組伴隨高水平的HBV DNA拷貝數(shù)，而HBeAg(一)組伴隨較低水平的HBV DNA拷貝數(shù)，以此作為分組依據(jù)(r=0.760，P=0.000)。(2)外周血單個核細胞TLR2的細胞陽性率和蛋白表達水平：HBeAg(+)組：PBMC TLR2的表達均明顯低于HBeAg(一)組和正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.004，P=0.003；P=0.000，P=0.000)；同時外周血單

4、個核細胞TLR2 mRNA的RT-PCR結(jié)果與免疫細胞化學的結(jié)果一致：HBeAg(+)組PBMC TLR2 mRNA的表達水平明顯低于HBeAg(一)組與正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000，P=0.000)；而外周血單個核細胞TLR4的免疫細胞化學結(jié)果顯示，三組間無顯著性差異(P>0.05)。(3)血清中TNF-α表達水平為HBeAg(一)組明顯高于HBeAg(+)組，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)；同時HBeAg(+)組

5、明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。 結(jié)論：(1)乙肝病毒攜帶者外周血單個核細胞TLR2的表達及活化與乙肝病毒的增殖有相關性：HBeAg陽性的乙肝攜帶者體內(nèi)病毒復制活躍、病毒DNA拷貝數(shù)高，與外周血單個核細胞TLR2的表達下調(diào)有關；相反，HBeAg陰性的乙肝攜帶者體內(nèi)病毒復制相對不活躍、病毒：DNA拷貝數(shù)低，與外周血單個核細胞TLR2的正常表達和活化上調(diào)有關。(2)乙肝病毒攜帶者外周血單個核細胞TLR4的表達