HBcAg對(duì)健康人及乙肝病毒攜帶者外周血單個(gè)核細(xì)胞刺激產(chǎn)生IFN-α影響的研究.pdf

1、目的:構(gòu)建表達(dá)乙肝病毒核心抗原(HBcAg)的復(fù)制缺陷型重組腺病毒載體,將其分別轉(zhuǎn)染健康人及乙肝病毒攜帶者外周血單個(gè)核細(xì)胞,觀察其刺激產(chǎn)生α干擾素水平并與TLR9的天然配體CpG ODN2006刺激效果進(jìn)行比較,以初步探討乙型肝炎病毒感染免疫識(shí)別狀態(tài)及乙肝病毒感染慢性化機(jī)制。
　　 方法:擴(kuò)增乙肝病毒(HBV)C基因片段,亞克隆到穿梭質(zhì)粒pAdTrack-CMV上,與5型腺病毒骨架質(zhì)粒pAdeasy-1共同電轉(zhuǎn)化大腸桿菌BJ51

2、83內(nèi)進(jìn)行同源重組,經(jīng)卡那霉素抗性篩選和酶切鑒定篩選出攜帶(HBV)C區(qū)基因的重組腺病毒載體,用脂質(zhì)體包裹PacⅠ酶切線性化的重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行重組腺病毒的包裝,獲得具有感染能力的重組腺病毒顆Ad-HBc。應(yīng)用密度梯度離心法從健康人(HBsAg陰性)及乙肝病毒攜帶者外周靜脈血中分離出單個(gè)核細(xì)胞,分為四組加入干預(yù)因素:Ad-HBc組、CpG ODN2006組、Ad-HBc+CpGODN2006組和空白對(duì)照組,孵育48小時(shí)后

3、采用ELISA檢測(cè)各組細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-α水平。
　　 結(jié)果:在健康人中,與空白對(duì)照組比較,Ad-HBc+CpG ODN2006組、Ad-HBc組和CpG ODN2006組中IFN-α均有明顯升高(P<0.05),Ad-HBc+CpG ODN2006組升高最明顯,Ad-HBc組次之,CpG ODN2006組最低。在攜帶者中,與空白對(duì)照組比較,Ad-HBc+CpG ODN2006組升高較明顯,CpG ODN2006組次之,Ad

4、-HBc組最低(P<0.05),且Ad-HBc組水平明顯低于健康人同組水平(P<0.05)。
　　 結(jié)論:攜帶乙肝核心抗原基因復(fù)制缺陷型重組腺病毒感染健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞能誘導(dǎo)增加健康人PBMC產(chǎn)生IFN-α的能力,且刺激效果優(yōu)于TLR9的配體CpG ODN2006。而在乙肝病毒攜帶者中,重組腺病毒感染外周血單個(gè)核細(xì)胞產(chǎn)生IFN-α水平低于健康人,提示與HBV持續(xù)感染造成外周血pDC功能下降有關(guān),為進(jìn)一步研究HBV持續(xù)感染的免