HBcAg對健康人及乙肝病毒攜帶者外周血單個核細胞刺激產(chǎn)生IFN-α影響的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:構建表達乙肝病毒核心抗原(HBcAg)的復制缺陷型重組腺病毒載體,將其分別轉染健康人及乙肝病毒攜帶者外周血單個核細胞,觀察其刺激產(chǎn)生α干擾素水平并與TLR9的天然配體CpG ODN2006刺激效果進行比較,以初步探討乙型肝炎病毒感染免疫識別狀態(tài)及乙肝病毒感染慢性化機制。
　　 方法:擴增乙肝病毒(HBV)C基因片段,亞克隆到穿梭質粒pAdTrack-CMV上,與5型腺病毒骨架質粒pAdeasy-1共同電轉化大腸桿菌BJ51

2、83內進行同源重組,經(jīng)卡那霉素抗性篩選和酶切鑒定篩選出攜帶(HBV)C區(qū)基因的重組腺病毒載體,用脂質體包裹PacⅠ酶切線性化的重組質粒,轉染到293T細胞內進行重組腺病毒的包裝,獲得具有感染能力的重組腺病毒顆Ad-HBc。應用密度梯度離心法從健康人(HBsAg陰性)及乙肝病毒攜帶者外周靜脈血中分離出單個核細胞,分為四組加入干預因素:Ad-HBc組、CpG ODN2006組、Ad-HBc+CpGODN2006組和空白對照組,孵育48小時后

3、采用ELISA檢測各組細胞培養(yǎng)上清中IFN-α水平。
　　 結果:在健康人中,與空白對照組比較,Ad-HBc+CpG ODN2006組、Ad-HBc組和CpG ODN2006組中IFN-α均有明顯升高(P<0.05),Ad-HBc+CpG ODN2006組升高最明顯,Ad-HBc組次之,CpG ODN2006組最低。在攜帶者中,與空白對照組比較,Ad-HBc+CpG ODN2006組升高較明顯,CpG ODN2006組次之,Ad

4、-HBc組最低(P<0.05),且Ad-HBc組水平明顯低于健康人同組水平(P<0.05)。
　　 結論:攜帶乙肝核心抗原基因復制缺陷型重組腺病毒感染健康人外周血單個核細胞能誘導增加健康人PBMC產(chǎn)生IFN-α的能力,且刺激效果優(yōu)于TLR9的配體CpG ODN2006。而在乙肝病毒攜帶者中,重組腺病毒感染外周血單個核細胞產(chǎn)生IFN-α水平低于健康人,提示與HBV持續(xù)感染造成外周血pDC功能下降有關,為進一步研究HBV持續(xù)感染的免

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