海洛因成癮戒斷大鼠相關(guān)腦區(qū)差異蛋白的分離與鑒定.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文海洛因成癮戒斷大鼠相關(guān)腦區(qū)差異蛋白的分離與鑒定姓名：邱平明申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：王慧君20070420摘要方法1 ．海洛因成癮戒斷大鼠模型的建立及病理學(xué)觀察成年雄性W i s t a r 大鼠，隨機(jī)分成3 組，設(shè)計(jì)海洛因初始劑量為4 m g ／k g 體重，每天遞增4 m g ／k g 體重，腹腔注射，3 次／天，共1 0 天，建立海洛因成癮模型；停藥后3 天作為自然戒斷大鼠模型；并

2、以生理鹽水代替海洛因注射作為對(duì)照組。利用納洛酮催促戒斷反應(yīng)，觀察戒斷癥狀并根據(jù)改進(jìn)的柳田知司評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分；記錄大鼠模型制作過(guò)程中不同時(shí)間體重變化。對(duì)各組的內(nèi)臟器官和腦組織進(jìn)行病理學(xué)觀察，并應(yīng)用免疫組化手段檢測(cè)腦損傷標(biāo)志分子G F A P 的表達(dá)變化。2 ．海洛因成癮和正常大鼠相關(guān)腦區(qū)D A 和代謝產(chǎn)物D O P A C 的檢測(cè)參照大鼠腦立體定位圖譜，分離海洛因成癮組和對(duì)照組各6 只大鼠P F C 、N A e 、海馬和紋狀體等腦組織

3、，制備樣品，利用高效液相色譜技術(shù)，檢測(cè)對(duì)照組和海洛因成癮組大鼠各相關(guān)腦區(qū)中的D A 以及代謝產(chǎn)物D O P A C 的含量，并觀察二者比值。3 ．大鼠不同腦區(qū)雙向電泳條件的建立選擇合適的組織裂解液，參照大鼠腦立體定位圖譜，分離P F C 、N A c 、海馬和紋狀體等腦區(qū)組織抽提蛋白，并經(jīng)冷丙酮沉淀除鹽，制備雙向電泳蛋白樣品，經(jīng)改良B r a d f o r d 法檢測(cè)蛋白濃度；選擇p H 3 ～1 0 線性固相p H 梯度預(yù)制膠( I

4、 P G ) ，利用2 一D E 技術(shù)在p H 3 ．1 0 范圍內(nèi)分離蛋白，分別用銀染法( 上樣量2 0 0 I lg ) 和考馬斯亮藍(lán)B l u e s i l v e r 染色法( 上樣量l m g ) 對(duì)凝膠進(jìn)行染色，并對(duì)兩種方法進(jìn)行比較。4 ．海洛因成癮戒斷大鼠和對(duì)照大鼠相關(guān)腦區(qū)差異蛋白的篩選和M A L D I - T O F - -T O F —M S 鑒定選擇p H 4 ～7 線性I P G ，在上述2 一D E 條件下