甘油氧化酶生產(chǎn)菌株的選育及甘油氧化酶酶學(xué)性質(zhì)的研究.pdf

1、甘油氧化酶(GlycerolOxidase，GLOX)在氧氣存在的情況下，可將甘油氧化為甘油醛，同時產(chǎn)生過氧化氫。甘油氧化酶可以替代甘油激酶和甘油磷酸氧化酶對血液中甘油三脂進行測定。甘油氧化酶還可將乙二醇經(jīng)由羥乙醛氧化為乙二醛，可將乙醇酸氧化為乙醛酸。因為酶催化反應(yīng)的速度快，無副產(chǎn)品產(chǎn)生，如將其用于工業(yè)生產(chǎn)乙二醛和乙醛酸，具有廣泛的應(yīng)用前景。 本研究從一株產(chǎn)甘油氧化酶的日本曲霉(AspergillusjaponicusSaito

2、)As8586出發(fā)，首先對其發(fā)酵條件進行了一系列的研究，然后分別通過紫外線和亞硝基胍誘變，獲得一株相對穩(wěn)定高產(chǎn)的誘變菌株Aj100015，其酶活力達到2.1U/ml；最后設(shè)計單因子實驗和正交實驗對原始培養(yǎng)基進行了優(yōu)化，結(jié)果在含4％甘油，0.4％酵母浸膏，0.13％K2HPO4，0.05％KCl，0.1％MgSO4，0.018％FeSO4，0.1％玉米漿，初始pH為6.2的培養(yǎng)基中，于30℃，200轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，培養(yǎng)48小時，產(chǎn)生的甘油

3、氧化酶活力最高，達到4.1U/ml。 通過收集菌體，高壓破碎，硫銨鹽析，SephadexG-25凝膠過濾，QSepharoseHP離子交換，SephacrylS-300凝膠過濾層析對甘油氧化酶蛋白進行了分離純化，并通過非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳確定其分子量為416KD，經(jīng)SDS-PAGE確定其由八個分子量約為52.3KD的亞基組成。等電聚焦電泳測得其等電點為4.9。 甘油氧化酶在以甘油為底物時，最適作用溫度為37℃，最適p