補腎活血湯對多囊卵巢大鼠的影響.pdf

1、YS0‘788湖北中醫(yī)學院碩士學位論文，補腎活血湯對多裳卵巢大鼠的影響研究生姓名：指導教師姓名、職稱：學科、專業(yè)名稱：研究方向：江勝芳張昌軍教授主任醫(yī)師中西醫(yī)結合臨床生殖醫(yī)學二OO六年四月二十八日湖北中醫(yī)學院2003級碩上研究生畢業(yè)論文摘要目的：本實驗成功地建立了多囊卵巢大鼠病理模型，并以此為研究對象，運用光鏡、放射免疫、免疫組化及末端脫氧核苷酸轉移酶介導的duTP缺口末端標記(TuNEL)技術，觀察中藥補腎活血湯對多囊卵巢大鼠內分泌、

2、卵巢形態(tài)學的影響，重點研究卵巢卵泡閉鎖，顙粒細胞凋亡及Bcl一2，Bax的表達情況，以期從細胞及分子水平揭示補腎活血湯的作用機制，為新藥的研制和開發(fā)提供理論依據(jù)。材料及方法：選用24日齡末成年雌性sD大鼠60只，隨機分為病理模型組50只和正常對照組lo只。應用皮下埋植左炔諾孕酮硅膠棒聯(lián)合皮下注射HcG法建立多囊卵巢動物模型。造模成功后給予補腎活血湯高、中、低劑量灌胃30天，對照組給予同容積蒸餾水灌胃。于24日齡、36日齡、67日齡測體重

3、，比較造模前后、用藥前后大鼠體重。大鼠斷頭處死，取血，收集血清樣品，放免法測定血清中孕酮(P)、雌二醇(E2)、睪酮(T)的含量。大鼠處死后立即取出雙側卵巢稱重，分別測量卵巢長徑(L)、短徑(s)，計算平均卵巢面積MOP=Lxs卵巢體積v=419((Ls比戶。卵巢切片常規(guī)HE染色，計算每張切片黃體數(shù)、囊狀卵泡數(shù)、囊狀擴張卵泡比例，進行卵泡膜細胞層最大厚度及顆粒細胞層最大厚度的顯微測量。TuNEL法檢測顆粒細胞凋亡，以細胞核出現(xiàn)褐色顆粒為

4、陽性結果，計算每張切片凋亡顆粒細胞數(shù)、闖鎖卵泡效，測量最大閉鎖卵泡直徑。采用免疫組織化學sABc法測定卵巢Bc卜2，Bax的表達以細胞漿內出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性結果每張切片在400倍高倍視野下隨機取5個視野，根據(jù)陽性細胞所占比例和染色強度進行半定量判定。染色強度按下列標準評定：陰性為。分；染色雖弱但明顯強于陰性對照者為1分；染色強度中等者為2分；染色強者為3分染色的陽性細胞所占比側評定標準為：陽性細胞數(shù)75％者為非常強陽性(4分)兩種評分

5、相加，即為其陽性積分數(shù)據(jù)處理：計量資科以均值士標準差表示，組問差異的比較采用雙側t檢驗率的比較采用兩樣本率等價比較的u檢驗。PO05為差別顯著，PO01為差別非常顯著結果：大鼠體重：補腎活血湯高、中、低劑量組大鼠用藥前體重與模型組比較無顯著性差異，用藥后均明顯低于模型組。卵巢犬體解剖觀察結果：遣模后模型組大鼠卵巢重量、體積、平均卵巢面積均大于對照組(P均O01)，卵巢表面較蒼白，見較多囊狀擴張的卵泡補腎活血湯治療后卵巢色澤紅潤，高劑量組