補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯對(duì)PCOS模型大鼠血清AMH水平及卵巢AMHRⅡ表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　觀察補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯對(duì)多囊卵巢綜合征（PCOS）模型大鼠動(dòng)情周期、血清抗苗勒氏管激素（AMH）水平、卵巢組織形態(tài)學(xué)及卵巢組織中抗苗勒氏管激素二型受體（AMHRⅡ）表達(dá)的影響，探討PCOS的發(fā)病機(jī)制及補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯治療作用機(jī)理。
　　方法：
　　將70日齡左右(平均體重270.56±2.13g）的SPF級(jí)SD雌性大鼠48只，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組36只和正常對(duì)照組12只（實(shí)驗(yàn)組:正常對(duì)照組為3:1），用Poretsky造模法對(duì)

2、實(shí)驗(yàn)組大鼠皮下注射胰島素（INS）和人絨毛膜促性腺激素（HCG），同時(shí)用5％葡萄糖溶液灌胃，構(gòu)建PCOS大鼠模型。造模完成后，隨機(jī)抽取實(shí)驗(yàn)組中大鼠6只和正常對(duì)照組中大鼠2只（實(shí)驗(yàn)組:正常對(duì)照組為3:1），行陰道脫落細(xì)胞涂片，測(cè)定血清雄烯二酮（ASD）、促黃體生成素（LH）水平，測(cè)量一側(cè)卵巢重量及長(zhǎng)徑，并觀察卵巢組織形態(tài)學(xué)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果判定造模是否成功。再將實(shí)驗(yàn)組大鼠按每組各10只的數(shù)量隨機(jī)分為3組：模型空白對(duì)照組、中藥組、西藥組。其后中

3、藥組大鼠用補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯灌胃處理；西藥組大鼠用炔雌醇環(huán)丙孕酮藥液灌胃處理；正常對(duì)照組和模型空白對(duì)照組大鼠用生理鹽水灌胃處理。給藥4天為一療程，每4天停1天，共15天（3個(gè)療程）后，光鏡下觀察各組大鼠陰道脫落細(xì)胞涂片連續(xù)10天，處死大鼠，采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)各組大鼠血清AMH水平，觀察卵巢組織形態(tài)學(xué)變化，同時(shí)應(yīng)用Western Blot法檢測(cè)大鼠卵巢組織中AMHRⅡ的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1．判定造模成功：正常對(duì)照組

4、大鼠精神、攝食、活動(dòng)等一般情況均較好，對(duì)外界刺激反應(yīng)敏捷。而實(shí)驗(yàn)組大鼠皮下注射INS和HCG造模22天后，均表現(xiàn)為體態(tài)肥胖，行動(dòng)較為遲緩，倦怠嗜睡，活動(dòng)少，毛色灰暗無(wú)光澤，且偶有脫毛等。隨機(jī)抽取實(shí)驗(yàn)組中大鼠6只，正常對(duì)照組中大鼠2只（實(shí)驗(yàn)組:正常對(duì)照組為3:1）。
　?。?）大鼠陰道脫落細(xì)胞檢查結(jié)果：正常對(duì)照組大鼠陰道脫落細(xì)胞涂片均可見(jiàn)規(guī)律的動(dòng)情周期；實(shí)驗(yàn)組大鼠陰道脫落細(xì)胞涂片均提示不規(guī)則的動(dòng)情周期，可見(jiàn)動(dòng)情周期紊亂，延長(zhǎng)或停滯。

5、
　　（2）ELISA法測(cè)定大鼠血清中雄烯二酮（ASD）、促黃體生成素（LH）水平，結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組大鼠較正常對(duì)照組大鼠血清ASD、LH水平升高。
　?。?）一側(cè)卵巢重量及長(zhǎng)徑比較，結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組大鼠較正常對(duì)照組大鼠卵巢重量重，卵巢長(zhǎng)徑長(zhǎng)。
　　（4）HE染色切片，觀察卵巢組織形態(tài)學(xué)，結(jié)果示：正常對(duì)照組大鼠卵巢鏡下可見(jiàn)發(fā)育各期卵泡及一定數(shù)量的黃體組織，皮髓質(zhì)形態(tài)結(jié)構(gòu)較清晰，多數(shù)生長(zhǎng)卵泡細(xì)胞較大，結(jié)構(gòu)正常，卵泡液含量多

6、，顆粒細(xì)胞層次較多，黃體體積較大，間質(zhì)無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn)及纖維化。實(shí)驗(yàn)組大鼠卵巢鏡下均見(jiàn)有較多數(shù)量的囊狀擴(kuò)張卵泡，卵泡內(nèi)顆粒細(xì)胞層數(shù)顯著減少甚至消失,不見(jiàn)卵母細(xì)胞及放射冠,黃體和發(fā)育各階段的卵泡數(shù)量顯著減少,卵泡膜細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞可見(jiàn)增生，提示卵泡發(fā)育異常及排卵障礙。
　　根據(jù)以上結(jié)果，判定為實(shí)驗(yàn)組大鼠造模成功。
　　2．用藥干預(yù)后大鼠陰道脫落細(xì)胞檢查結(jié)果：西藥組和中藥組經(jīng)藥物干預(yù)處理后，大鼠紊亂的動(dòng)情周期有所改善，主要體現(xiàn)在動(dòng)情周

7、期、動(dòng)情間期逐步恢復(fù)，趨于正常；而模型空白對(duì)照組仍表現(xiàn)為不規(guī)則的動(dòng)情周期，可見(jiàn)動(dòng)情周期紊亂，延長(zhǎng)或停滯。
　　3．用藥干預(yù)后大鼠卵巢組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)：用藥干預(yù)后，西藥組和中藥組大鼠卵巢鏡下可見(jiàn)差異發(fā)育的卵泡及較多數(shù)量的黃體，卵泡內(nèi)多層顆粒細(xì)胞，提示卵泡發(fā)育及排卵狀況逐漸恢復(fù)正常；而模型空白對(duì)照組仍表現(xiàn)為卵泡發(fā)育異常及排卵障礙。
　　4．用藥干預(yù)后大鼠血清AMH水平檢測(cè)：模型空白對(duì)照組大鼠血清AMH水平較正常對(duì)照組顯著升高，差異

8、明顯（P＜0.05）；與模型空白對(duì)照組相比，西藥組和中藥組大鼠血清AMH水平均有下降趨勢(shì)，差異并不明顯（p﹥0.05）。
　　5．用藥干預(yù)后大鼠卵巢組織中AMHRⅡ的表達(dá)：模型空白對(duì)照組大鼠卵巢AMHRⅡ表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型空白對(duì)照組相比，西藥組和中藥組大鼠卵巢 AMHRⅡ表達(dá)均顯著降低，差異明顯（P＜0.05）；中藥組大鼠卵巢AMHRⅡ表達(dá)低于西藥組，差異不顯著（p﹥0.05）。<

9、br>　　結(jié)論：
　　1．運(yùn)用Poretsky造模法皮下注射INS和HCG可以成功建立PCOS大鼠模型；
　　2．補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯和炔雌醇環(huán)丙孕酮均有降低PCOS模型大鼠血清AMH水平的作用趨勢(shì)；
　　3．補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯和炔雌醇環(huán)丙孕酮均能下調(diào)PCOS模型大鼠卵巢組織中AMHRⅡ的表達(dá)；
　　4．PCOS的發(fā)病機(jī)制可能與AMH信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)，補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯可能通過(guò)此環(huán)節(jié)，有效改善 PCOS模型大鼠卵巢組織原始卵泡的發(fā)育及排卵狀況